|
|
|
|
Навигация
Новые документы
Реклама
Ресурсы в тему
|
Приказ Министерства здравоохранения Республики Беларусь от 20.05.2009 № 488 "Об утверждении инструкции по лабораторной диагностике сифилиса"< Главная страница На основании Положения о Министерстве здравоохранения Республики Беларусь, утвержденного постановлением Совета Министров Республики Беларусь от 23 августа 2000 г. N 1331, в редакции постановления Совета Министров Республики Беларусь от 1 августа 2005 г. N 843, в целях совершенствования организации медицинской помощи населению республики ПРИКАЗЫВАЮ: 1. Утвердить инструкцию по лабораторной диагностике сифилиса (далее - Инструкция). 2. Начальникам управления здравоохранения областных исполнительных комитетов, председателю комитета по здравоохранению Мингорисполкома, руководителям республиканских организаций здравоохранения принять необходимые меры для внедрения Инструкции в практическую работу. 3. Ректорам медицинских университетов, ректору Белорусской медицинской академии последипломного образования внедрить Инструкцию в учебный процесс. 4. Контроль за исполнением приказа возложить на начальника управления организации медицинской помощи Волжанкину Г.В. Заместитель Министра В.Е.Шевчук УТВЕРЖДЕНО
Приказ Министерства
здравоохранения
Республики Беларусь
20.05.2009 N 488
ОБЩИЕ ПОЛОЖЕНИЯ1. На территории Республики Беларусь лабораторная диагностика сифилитической инфекции осуществляется в клинико-диагностических и серологических лабораториях юридическими лицами всех форм собственности и индивидуальными предпринимателями. 2. Данная Инструкция разработана для решения следующих задач: - определения показаний к обследованию на сифилитическую инфекцию; - определения спектра диагностических методов, используемых для диагностики сифилитической инфекции; - установления единых требований к порядку диагностики сифилитической инфекции. 3. Для диагностики сифилиса могут быть использованы нетрепонемные (реакция микропреципитации с инактивированной сывороткой - РМП, реакция быстрых плазменных реагинов - RPR) и трепонемные тесты (иммуноферментный анализ - ИФА, реакция непрямой иммунофлюоресценции - РИФ, реакция пассивной гемагглютинации - РПГА). 3.1. Клинический диагноз первичного сифилиса подтверждается: - обнаружением Treponema pallidum в нативном препарате; - и / или положительными результатами одного трепонемного и одного нетрепонемного теста. 3.2. Клинический диагноз вторичного и скрытого раннего сифилиса подтверждается: - положительными результатами одного трепонемного и одного нетрепонемного теста. 3.3. Клинический диагноз позднего сифилиса подтверждается: - положительными результатами не менее чем двух трепонемных тестов. 3.4. Клинический диагноз нейросифилиса подтверждается: - положительными результатами не менее чем двух трепонемных тестов с сывороткой крови; - результатами комплексной оценки изменений ликвора, с определением степени выраженности показателей воспалительного компонента: морфологический состав (количественный и качественный цитоз), биохимические показатели (общий белок, глобулины/альбумины), расчетные индексы и коэффициенты (альбуминовый коэффициент; IgG-коэффициент; IgG-индекс; РПГА-индекс), а также степени выраженности специфического компонента (нетрепонемный и трепонемный тесты). 4. Инструкция включает в себя следующие приложения: Приложение 1. Перечень медицинских показаний для обязательного клинико-лабораторного обследования на сифилитическую инфекцию; Приложение 2. Перечень медицинских показаний для проведения спинномозговой пункции. Приложение 3. Правила отбора, транспортировки и хранения первичных проб при обследовании пациентов на сифилитическую инфекцию; Приложение 4. Методика исследования на Treponema pallidum в темном поле зрения; Приложение 5. Методика реакции микропреципитации с кардиолипиновым антигеном; Приложение 6. Методика реакции быстрых плазменных реагинов; Приложение 7. Методика выявления суммарных антител (или антител одного класса) к Treponema pallidum в сыворотке крови, плазме, спинномозговой жидкости методом иммуноферментного анализа; Приложение 8. Методика выявления суммарных антител (или антител одного класса) к Treponema pallidum методом реакции пассивной гемагглютинации; Приложение 9. Методика выявления суммарных антител к Treponema pallidum в сыворотке крови, спинномозговой жидкости методом непрямой иммунофлюоресценции; Приложение 10. Порядок включения выполненных лабораторией исследований в статистический отчет. Приложение 1 ПЕРЕЧЕНЬ МЕДИЦИНСКИХ ПОКАЗАНИЙ ДЛЯ ОБЯЗАТЕЛЬНОГО КЛИНИКО-ЛАБОРАТОРНОГО ОБСЛЕДОВАНИЯ НА СИФИЛИТИЧЕСКУЮ ИНФЕКЦИЮВ зависимости от клинической ситуации и контингентов, подлежащих обследованию, для обязательного клинико-лабораторного обследования на сифилитическую инфекцию могут использоваться: 1. Микрореакция преципитации с сывороткой крови (далее - МРП). 2. Тест быстрых плазменных реагинов (далее - RPR). 3. Иммуноферментный анализ (далее - ИФА). 4. Реакция пассивной гемагглютинации (далее - РПГА). 5. Реакция иммунофлюоресценции с абсорбцией (далее - РИФ-абс). I. МРП (или RPR) + ИФА (или РПГА) + РИФ-абс ----+--------------------------------------------------+-------------- ¦ N ¦ Контингенты, подлежащие обследованию ¦ Кратность ¦ ¦п/п¦ ¦ ¦ +---+--------------------------------------------------+------------------+ ¦ 1 ¦Лица, имевшие контакт (половой или тесный бытовой)¦При первичном ¦ ¦ ¦с больным сифилисом ¦обращении ¦ ¦---+--------------------------------------------------+------------------- II. МРП (или RPR) + ИФА (или РПГА) ----+-----------------------------------------+----------------------- ¦ N ¦ Контингенты, подлежащие обследованию ¦ Кратность ¦ ¦п/п¦ ¦ ¦ +---+-----------------------------------------+---------------------------+ ¦ 1 ¦Беременные ¦Исследование проводится ¦ ¦ ¦ ¦четыре раза: ¦ ¦ ¦ ¦1. При постановке на учет. ¦ ¦ ¦ ¦2. В сроке 18 - 20 недель. ¦ ¦ ¦ ¦3. В сроке 30 - 32 недели. ¦ ¦ ¦ ¦4. При поступлении в роддом¦ ¦ ¦ ¦(при отсутствии данных ¦ ¦ ¦ ¦серологического ¦ ¦ ¦ ¦обследования) ¦ +---+-----------------------------------------+---------------------------+ ¦ 2 ¦Невынашивание беременности, ¦При первичном обращении ¦ ¦ ¦преждевременные роды, мертворождение ¦ ¦ +---+-----------------------------------------+---------------------------+ ¦ 3 ¦Лица, подвергшиеся сексуальному насилию ¦Исследование проводится ¦ ¦ ¦ ¦дважды: ¦ ¦ ¦ ¦1. При первичном обращении.¦ ¦ ¦ ¦2. Через 6 недель ¦ +---+-----------------------------------------+---------------------------+ ¦ 4 ¦Лица из "групп риска" (мужчины, имеющие ¦При первичном обращении ¦ ¦ ¦секс с мужчинами (МСМ), работники ¦ ¦ ¦ ¦коммерческого секса) ¦ ¦ +---+-----------------------------------------+---------------------------+ ¦ 5 ¦Доноры крови, плазмы и других ¦При каждом обращении ¦ ¦ ¦биологических жидкостей и тканей ¦ ¦ +---+-----------------------------------------+---------------------------+ ¦ 6 ¦Медицинские работники в случае контакта с¦Исследование проводится ¦ ¦ ¦заразным биологическим материалом ¦дважды: ¦ ¦ ¦пациента, возникающего в результате ¦1. При первичном обращении.¦ ¦ ¦аварийной ситуации (порез, укол и т.д.) ¦2. Через 6 недель ¦ +---+-----------------------------------------+---------------------------+ ¦ 7 ¦Мягкий шанкр, паховый лимфогранулематоз, ¦При первичном обращении ¦ ¦ ¦донованоз, эрозивно-язвенные поражения ¦ ¦ ¦ ¦кожи и слизистых любой локализации <*> ¦ ¦ +---+-----------------------------------------+---------------------------+ ¦ 8 ¦Психические заболевания ¦При первичном обращении и ¦ ¦ ¦ ¦далее 1 раз в год ¦ ¦---+-----------------------------------------+---------------------------- -------------------------------- <*> Дополнительно проводится темнопольная микроскопия отделяемого эрозивных или язвенных дефектов кожи и слизистых оболочек (при отсутствии положительного результата исследования и отрицательных серологических реакциях - не менее трех раз). IV. ИФА (или РПГА) ----+------------------------------------------------+---------------- ¦ N ¦ Контингенты, подлежащие обследованию ¦ Кратность ¦ ¦п/п¦ ¦ ¦ +---+------------------------------------------------+--------------------+ ¦ 1 ¦Поражения органа слуха (тугоухость), нарушение ¦При первичном ¦ ¦ ¦функции вестибулярного аппарата ¦обращении ¦ +---+------------------------------------------------+--------------------+ ¦ 2 ¦Миокардит, аортит, аневризма аорты, ¦При первичном ¦ ¦ ¦приобретенные пороки сердца, воспалительные ¦обращении ¦ ¦ ¦изменения паренхиматозных органов неясной ¦ ¦ ¦ ¦этиологии ¦ ¦ +---+------------------------------------------------+--------------------+ ¦ 3 ¦Остеомиелиты, остеопериоститы, синовииты ¦При первичном ¦ ¦ ¦ ¦обращении ¦ +---+------------------------------------------------+--------------------+ ¦ 4 ¦Менингоневриты, менингиты, энцефалиты, миелиты, ¦При первичном ¦ ¦ ¦полирадикулоневриты, менинговаскулиты по типу ¦обращении ¦ ¦ ¦ишемических и геморрагических инсультов, ¦ ¦ ¦ ¦васкулиты спинного мозга, объемные процессы ¦ ¦ ¦ ¦головного и спинного мозга, мононевриты, ¦ ¦ ¦ ¦полиневриты, плекситы, клинические проявления ¦ ¦ ¦ ¦табеса ¦ ¦ +---+------------------------------------------------+--------------------+ ¦ 5 ¦ВИЧ-инфекция, носители маркеров парентеральных ¦При первичном ¦ ¦ ¦гепатитов ¦обращении и далее 1 ¦ ¦ ¦ ¦раз в год на период ¦ ¦ ¦ ¦диспансерного ¦ ¦ ¦ ¦наблюдения ¦ ¦---+------------------------------------------------+--------------------- V. МРП (или RPR) ----+--------------------------------------+-------------------------- ¦ N ¦ Контингенты, подлежащие обследованию ¦ Кратность ¦ ¦п/п¦ ¦ ¦ +---+--------------------------------------+------------------------------+ ¦ 1 ¦Скрининговое обследование с целью ¦При первичном обращении ¦ ¦ ¦выявления инфекций, передаваемых ¦ ¦ ¦ ¦половым путем, в том числе лица с ¦ ¦ ¦ ¦установленным диагнозом ИППП и при ¦ ¦ ¦ ¦анонимном обследовании ¦ ¦ +---+--------------------------------------+------------------------------+ ¦ 2 ¦Чесотка, педикулез ¦При первичном обращении ¦ +---+--------------------------------------+------------------------------+ ¦ 3 ¦Глоссит, ларингит, сопровождающийся ¦При первичном обращении ¦ ¦ ¦дисфонией ¦ ¦ +---+--------------------------------------+------------------------------+ ¦ 4 ¦Геморрой, трещина заднего прохода, ¦При первичном обращении ¦ ¦ ¦проктит, парапроктит ¦ ¦ +---+--------------------------------------+------------------------------+ ¦ 5 ¦Высыпания на коже и слизистых ¦При первичном обращении ¦ ¦ ¦оболочках, сопровождающиеся ¦ ¦ ¦ ¦лимфангитом, лимфаденитом; алопеция; ¦ ¦ ¦ ¦температурные реакции на прием ¦ ¦ ¦ ¦антибактериальных препаратов ¦ ¦ +---+--------------------------------------+------------------------------+ ¦ 6 ¦Подростки, состоящие на учете в ¦При взятии на учет ¦ ¦ ¦инспекциях по делам несовершеннолетних¦ ¦ +---+--------------------------------------+------------------------------+ ¦ 7 ¦Женщины, направляемые на прерывание ¦При первичном обращении ¦ ¦ ¦беременности или внутриматочные ¦ ¦ ¦ ¦манипуляции ¦ ¦ +---+--------------------------------------+------------------------------+ ¦ 8 ¦Пациенты, состоящие на учете в ¦При первичном обращении ¦ ¦ ¦наркологических диспансерах ¦и далее 1 раз в год ¦ +---+--------------------------------------+------------------------------+ ¦ 9 ¦Злокачественные новообразования ¦При первичном обращении ¦ +---+--------------------------------------+------------------------------+ ¦10 ¦При госпитализации лиц в возрасте ¦При отсутствии данных ¦ ¦ ¦старше 13 лет (кроме клинических ¦достоверного результата ¦ ¦ ¦показаний, указанных выше) ¦обследования за последний ¦ ¦ ¦ ¦1 месяц ¦ +---+--------------------------------------+------------------------------+ ¦11 ¦Лица, подлежащие медицинским и ¦При первичном обращении и ¦ ¦ ¦профилактическим осмотрам <*> ¦далее в соответствии с ¦ ¦ ¦ ¦нормативными документами ¦ ¦ ¦ ¦Министерства здравоохранения ¦ ¦ ¦ ¦Республики Беларусь ¦ ¦---+--------------------------------------+------------------------------- -------------------------------- <*> Реакции могут проводиться как с сывороткой, так и с плазмой крови. В случае направления материала для исследования в централизованную лабораторию или лабораторию другого учреждения здравоохранения ответственность за правильность сортировки материала, заполнение направлений и общих ведомостей лежит на направляющем учреждении. До этапа транспортировки материал должен быть сортирован в зависимости от планируемого метода (или сочетания методов), которым должно быть проведено исследование. При доставке в централизованные лаборатории на каждую группу методов исследования должна заполняться отдельная ведомость ф. N 201/у-07. Приложение 2 ПЕРЕЧЕНЬ МЕДИЦИНСКИХ ПОКАЗАНИЙ ДЛЯ ПРОВЕДЕНИЯ СПИННОМОЗГОВОЙ ПУНКЦИИК показаниям для диагностического исследования спинномозговой жидкости при сифилисе относятся: Абсолютные показания: - клинико-неврологическая очаговая симптоматика и микросимптоматика у больных сифилисом любой формы; - расстройства психической сферы у больных сифилисом любой формы; - пациенты с несостоятельностью проведенной этиотропной терапии (клинический рецидив, серологический рецидив, серорезистентность); - сифилис у больных ВИЧ-инфекцией/СПИДом; - снятие с учета по нейросифилису. Относительные показания: - злокачественное течение манифестного сифилиса (алопеция, лейкодерма, пустулезный сифилид); - поздние формы сифилиса; - дети, рожденные от матерей, не получавших лечения по поводу сифилиса во время беременности. К противопоказаниям для диагностического исследования спинномозговой жидкости относятся: - клинические и инструментальные (КТ, МРТ) признаки отека головного мозга; - застойные диски зрительных нервов; - дислокационный синдром; - объемные процессы головного мозга (опухоли, гуммы, абсцесс, субдуральная гематома); - острые инфекционные заболевания (ОРВИ, ангина и др.); - инфекция мягких тканей в месте предполагаемой пункции; - выраженная тромбоцитопения (менее 40000/мкл) или снижение времени свертывания крови более чем на 50%. Приложение 3 ПРАВИЛА ОТБОРА, ТРАНСПОРТИРОВКИ И ХРАНЕНИЯ ПЕРВИЧНЫХ ПРОБ ПРИ ОБСЛЕДОВАНИИ ПАЦИЕНТОВ НА СИФИЛИТИЧЕСКУЮ ИНФЕКЦИЮI. Правила отбора первичной пробы серозного отделяемого с поверхности эрозий, язв, мацерированных, эрозированных, изъязвленных папул, пустул: -------------------+-------------------------------------------------- ¦1. Наименование ¦Отбор первичной пробы серозного отделяемого с ¦ ¦процедуры ¦поверхности эрозий, язв, мацерированных, ¦ ¦ ¦эрозированных, изъязвленных папул, пустул ¦ +------------------+------------------------------------------------------+ ¦2. Требования к ¦Специалист, имеющий диплом установленного образца об ¦ ¦специалистам ¦окончании высшего медицинского образовательного ¦ ¦(кто участвует в ¦учебного заведения ¦ ¦выполнении ¦ ¦ ¦процедуры) ¦ ¦ +------------------+------------------------------------------------------+ ¦3. Требования к ¦1. Безопасность работы с микроорганизмами III - IV ¦ ¦обеспечению ¦групп патогенности с гельминтами. СП 17-129РБ 2000. ¦ ¦безопасности труда¦2. Применение ультрафиолетового бактерицидного ¦ ¦медицинского ¦излучения для обеззараживания воздуха и поверхностей ¦ ¦персонала ¦в лечебно-профилактических учреждениях от 01.06.2001 ¦ ¦ ¦N 26-01-01. ¦ ¦ ¦3. Приказ МЗ РБ от 25 ноября 2002 г. N 165 "О ¦ ¦ ¦проведении дезинфекции и стерилизации учреждениями ¦ ¦ ¦здравоохранения". ¦ ¦ ¦4. Методические указания МУ N 90-9908 "Контроль ¦ ¦ ¦качества стерилизации изделий медицинского ¦ ¦ ¦назначения", Минск, 1999 г. ¦ ¦ ¦5. Санитарные правила и нормы 2.1.7.14-20-2005 ¦ ¦ ¦"Правила обращения с медицинскими отходами". ¦ ¦ ¦Инструкция 4.2.10-22-1-2006 "Методы ¦ ¦ ¦микробиологического контроля санитарно-гигиенического ¦ ¦ ¦состояния помещений в организациях здравоохранения и ¦ ¦ ¦стерильности изделий медицинского назначения" ¦ +------------------+------------------------------------------------------+ ¦4. Приборы, ¦1) Стерильные марлевые салфетки. ¦ ¦инструменты, ¦2) Стерильные медицинские перчатки. ¦ ¦изделия ¦3) Ложки Фолькмана. ¦ ¦медицинского ¦4) Пинцет. ¦ ¦назначения ¦5) Лоток. ¦ ¦ ¦6) Предметные стекла. ¦ ¦ ¦7) Покровные стекла. ¦ ¦ ¦8) Бактериологическая петля. ¦ ¦ ¦9) Стерильный физиологический раствор. ¦ ¦ ¦10) Маркер. ¦ ¦ ¦11) Манипуляционный столик. ¦ ¦ ¦12) Кушетка, гинекологическое кресло. ¦ ¦ ¦13) Одноразовый гинекологический набор. ¦ ¦ ¦14) Этиловый спирт 70%; антисептики, разрешенные к ¦ ¦ ¦применению Министерством здравоохранения Республики ¦ ¦ ¦Беларусь ¦ +------------------+------------------------------------------------------+ ¦5. Методика ¦I. Подготовка к процедуре: ¦ ¦выполнения ¦1. Объяснить пациенту ход и цель процедуры; убедиться ¦ ¦процедуры ¦в наличии у пациента информированного согласия на ¦ ¦ ¦предстоящую процедуру. ¦ ¦ ¦2. Оформить бланк направления для лабораторного ¦ ¦ ¦исследования. ¦ ¦ ¦3. Промаркировать предметное стекло, предназначенное ¦ ¦ ¦для взятия биологического материала. ¦ ¦ ¦4. Произвести гигиеническую антисептическую обработку ¦ ¦ ¦рук. ¦ ¦ ¦5. Надеть стерильные медицинские перчатки. ¦ ¦ ¦6. Обеспечить свободный доступ к язвенному дефекту. ¦ ¦ ¦7. Тщательно и осторожно очистить поверхность дефект. ¦ ¦ ¦кожи или слизистой с помощью марлевой салфетки, ¦ ¦ ¦смоченной стерильным физиологическим раствором, не ¦ ¦ ¦травмируя поверхность. ¦ ¦ ¦II. Выполнение процедуры: ¦ ¦ ¦1. Метод раздражения. ¦ ¦ ¦Стерильной ложкой Фолькмана произвести осторожные ¦ ¦ ¦(исключая повреждение сосудов), поглаживающие ¦ ¦ ¦движения по поверхности элемента. Через 10 - 60 секунд¦ ¦ ¦на поверхности элемента образуется прозрачная, слегка ¦ ¦ ¦опалесцирующая тканевая жидкость. В случае появления ¦ ¦ ¦кровотечения его следует остановить, прижав ватный ¦ ¦ ¦тампон к поверхности элемента, после чего продолжить ¦ ¦ ¦поглаживания. Полученное серозное отделяемое смешать ¦ ¦ ¦на предметном стекле с равным количеством ¦ ¦ ¦физиологического раствора, накрыть покровным стеклом ¦ ¦ ¦и полученный нативный препарат исследовать под ¦ ¦ ¦микроскопом. ¦ ¦ ¦2. Метод сдавливания. ¦ ¦ ¦После очистки сдавить края эрозии / язвы пальцами или ¦ ¦ ¦пинцетом, стимулируя выделение серозного экссудата. ¦ ¦ ¦Собрать экссудат с поверхности бактериологической ¦ ¦ ¦петлей, браншей пинцета или путем аккуратного ¦ ¦ ¦прикладывания к поверхности эрозии / язвы стерильного ¦ ¦ ¦предметного стекла. Полученное отделяемое смешать на ¦ ¦ ¦предметном стекле с равным количеством ¦ ¦ ¦физиологического раствора, накрыть покровным стеклом, ¦ ¦ ¦и полученный нативный препарат исследовать под ¦ ¦ ¦микроскопом. ¦ ¦ ¦3. Метод скарификации. ¦ ¦ ¦Используется при исследовании сухих элементов ¦ ¦ ¦(розеолы, папулы, эпителизированные эрозии). ¦ ¦ ¦Поверхность исследуемого элемента скарифицировать. ¦ ¦ ¦Остановить появляющееся капиллярное кровотечение и ¦ ¦ ¦методом раздражения скарифицированной поверхности ¦ ¦ ¦получить серозную жидкость. Полученное отделяемое ¦ ¦ ¦смешать на предметном стекле с равным количеством ¦ ¦ ¦физиологического раствора, накрыть покровным стеклом ¦ ¦ ¦и полученный нативный препарат исследовать под ¦ ¦ ¦микроскопом. ¦ ¦ ¦Первичная проба хранению не подлежит. ¦ ¦ ¦III. Окончание процедуры: ¦ ¦ ¦1. Подвергнуть дезинфекции расходный материал. ¦ ¦ ¦2. Снять перчатки, поместить их в емкость для ¦ ¦ ¦дезинфекции. ¦ ¦ ¦3. Произвести гигиеническую антисептическую обработку ¦ ¦ ¦рук. ¦ ¦ ¦В случае получения отрицательного результата при ¦ ¦ ¦первичном исследовании назначить пациенту примочки с ¦ ¦ ¦физиологическим раствором, после чего отбор пробы ¦ ¦ ¦повторить через 24 часа ¦ ¦------------------+------------------------------------------------------- II. Правила отбора первичной пробы пунктата лимфатического узла: ---------------------+------------------------------------------------ ¦1. Наименование ¦Отбор первичной пробы пунктата лимфатического узла ¦ ¦процедуры ¦ ¦ +--------------------+----------------------------------------------------+ ¦2. Требования к ¦Специалист, имеющий диплом установленного образца об¦ ¦специалистам ¦окончании высшего медицинского образовательного¦ ¦(кто участвует в ¦учебного заведения ¦ ¦выполнении ¦ ¦ ¦процедуры) ¦ ¦ +--------------------+----------------------------------------------------+ ¦3. Требования к ¦1. Безопасность работы с микроорганизмами III - IV ¦ ¦обеспечению ¦групп патогенности с гельминтами. СП 17-129РБ 2000. ¦ ¦безопасности труда ¦2. Применение ультрафиолетового бактерицидного ¦ ¦медицинского ¦излучения для обеззараживания воздуха и поверхностей¦ ¦персонала ¦в лечебно-профилактических учреждениях от ¦ ¦ ¦01.06.2001 N 26-01-01. ¦ ¦ ¦3. Приказ МЗ РБ от 25 ноября 2002 г. N 165 "О ¦ ¦ ¦проведении дезинфекции и стерилизации учреждениями ¦ ¦ ¦здравоохранения". ¦ ¦ ¦4. Методические указания МУ N 90-9908 "Контроль ¦ ¦ ¦качества стерилизации изделий медицинского ¦ ¦ ¦назначения", Минск, 1999 г. ¦ ¦ ¦5. Санитарные правила и нормы 2.1.7.14-20-2005 ¦ ¦ ¦"Правила обращения с медицинскими отходами". ¦ ¦ ¦6. Инструкция 4.2.10-22-1-2006 "Методы ¦ ¦ ¦микробиологического контроля санитарно- ¦ ¦ ¦гигиенического состояния помещений в организациях ¦ ¦ ¦здравоохранения и стерильности изделий медицинского ¦ ¦ ¦назначения" ¦ +--------------------+----------------------------------------------------+ ¦4. Приборы, ¦1) Стерильные марлевые салфетки, ватные шарики. ¦ ¦инструменты, изделия¦2) Стерильные медицинские перчатки. ¦ ¦медицинского ¦3) Спиртовой раствор йода 5%. ¦ ¦назначения ¦4) Этиловый спирт 70%. ¦ ¦ ¦5) Стерильный пинцет. ¦ ¦ ¦6) Стерильные пеленки. ¦ ¦ ¦7) Лоток. ¦ ¦ ¦8) Шприц одноразовый объемом 20 мл. ¦ ¦ ¦9) Шприц одноразовый объемом 2 мл. ¦ ¦ ¦10) Тонкая игла с наружным диаметром 0,6 - 0,7 мм. ¦ ¦ ¦11) Раствор анестетика, разрешенного к применению ¦ ¦ ¦Министерством здравоохранения Республики Беларусь. ¦ ¦ ¦12) Лейкопластырь. ¦ ¦ ¦13) Пробирка типа Эппендорф. ¦ ¦ ¦14) Маркер. ¦ ¦ ¦15) Манипуляционный столик. ¦ ¦ ¦16) Кушетка ¦ +--------------------+----------------------------------------------------+ ¦5. Методика ¦I. Подготовка к процедуре: ¦ ¦выполнения процедуры¦1. Объяснить пациенту ход и цель процедуры; ¦ ¦ ¦убедиться в наличии у пациента информированного ¦ ¦ ¦согласия на предстоящую процедуру. ¦ ¦ ¦2. Оформить бланк направления для лабораторного ¦ ¦ ¦исследования. ¦ ¦ ¦3. Промаркировать пробирку, предназначенную для ¦ ¦ ¦первичной пробы пунктата лимфатического узла. ¦ ¦ ¦4. Произвести гигиеническую антисептическую ¦ ¦ ¦обработку рук. ¦ ¦ ¦5. Надеть стерильные медицинские перчатки. ¦ ¦ ¦II. Выполнение процедуры: ¦ ¦ ¦1. Пропальпировать плотный, подвижный лимфатический ¦ ¦ ¦узел без признаков воспаления. ¦ ¦ ¦2. Произвести антисептическую последовательную ¦ ¦ ¦обработку операционного поля над лимфатическим узлом¦ ¦ ¦спиртовым раствором йода 5% и спирта 70%, осушить ¦ ¦ ¦его. ¦ ¦ ¦3. Набрать в одноразовый шприц объемом 2 мл раствор ¦ ¦ ¦анестетика. ¦ ¦ ¦4. Ввести раствор антисептика внутрикожно до ¦ ¦ ¦образования "лимонной корочки". ¦ ¦ ¦5. Набрать в одноразовый шприц объемом 20 мл ¦ ¦ ¦стерильный физиологический раствор - 1 мл. ¦ ¦ ¦6. Зафиксировать лимфатический узел между двумя ¦ ¦ ¦пальцами левой руки. ¦ ¦ ¦7. Правой рукой ввести в узел иглу, соединенную со ¦ ¦ ¦шприцем, в котором находится 1 мл стерильного ¦ ¦ ¦физиологического раствора комнатной температуры. ¦ ¦ ¦Прокол произвести у одного из полюсов лимфатического¦ ¦ ¦узла и проталкивать иглу по направлению длинной оси ¦ ¦ ¦до противоположного полюса, нагнетая при этом ¦ ¦ ¦содержащийся в шприце физиологический раствор в ¦ ¦ ¦узел. ¦ ¦ ¦8. Медленно вывести иглу из узла, одновременно ¦ ¦ ¦оттягивая поршень шприца на себя. ¦ ¦ ¦9. Последовательно обработать операционное поле ¦ ¦ ¦раствором спирта 70% и спиртовым раствором йода 5%. ¦ ¦ ¦10. Наложить стерильную салфетку на место прокола, ¦ ¦ ¦зафиксировать ее лейкопластырем. ¦ ¦ ¦III. Окончание процедуры: ¦ ¦ ¦1. Полученную первичную пробу пунктата ¦ ¦ ¦лимфатического узла поместить в подготовленную ¦ ¦ ¦маркированную пробирку типа Эппендорф и немедленно ¦ ¦ ¦доставить в лабораторию. ¦ ¦ ¦2. Подвергнуть дезинфекции расходный материал. ¦ ¦ ¦3. Снять перчатки, поместить их в емкость для ¦ ¦ ¦дезинфекции. ¦ ¦ ¦4. Произвести гигиеническую антисептическую ¦ ¦ ¦обработку рук ¦ ¦--------------------+----------------------------------------------------- III. Правила отбора первичной пробы капиллярной крови: -----------------------+---------------------------------------------- ¦1. Наименование ¦Отбор первичной пробы капиллярной крови ¦ ¦процедуры ¦ ¦ +----------------------+--------------------------------------------------+ ¦2. Требования к ¦Специалист, имеющий диплом установленного образца ¦ ¦специалистам (кто ¦об окончании среднего специального ¦ ¦участвует в выполнении¦образовательного учебного заведения ¦ ¦процедуры) ¦ ¦ +----------------------+--------------------------------------------------+ ¦3. Требования к ¦1. Безопасность работы с микроорганизмами III - IV¦ ¦обеспечению ¦групп патогенности с гельминтами. СП 17-129РБ ¦ ¦безопасности труда ¦2000. ¦ ¦медицинского персонала¦2. Применение ультрафиолетового бактерицидного ¦ ¦ ¦излучения для обеззараживания воздуха и ¦ ¦ ¦поверхностей в лечебно-профилактических ¦ ¦ ¦учреждениях от 01.06.2001 N 26-01-01. ¦ ¦ ¦3. Приказ МЗ РБ от 25 ноября 2002 г. N 165 "О ¦ ¦ ¦проведении дезинфекции и стерилизации учреждениями¦ ¦ ¦здравоохранения". ¦ ¦ ¦4. Методические указания МУ N 90-9908 "Контроль ¦ ¦ ¦качества стерилизации изделий медицинского ¦ ¦ ¦назначения", Минск, 1999 г. ¦ ¦ ¦5. Санитарные правила и нормы 2.1.7.14-20-2005 ¦ ¦ ¦"Правила обращения с медицинскими отходами". ¦ ¦ ¦6. Инструкция 4.2.10-22-1-2006 "Методы ¦ ¦ ¦микробиологического контроля санитарно- ¦ ¦ ¦гигиенического состояния помещений в организациях ¦ ¦ ¦здравоохранения и стерильности изделий ¦ ¦ ¦медицинского назначения" ¦ +----------------------+--------------------------------------------------+ ¦4. Приборы, ¦1) Скарификатор. ¦ ¦инструменты, изделия ¦2) Капилляр Панченкова. ¦ ¦медицинского ¦3) Раствор цитрата натрия трехзамещенный 5%. ¦ ¦назначения ¦4) Пробирка (одноразовая или стеклянная) с ¦ ¦ ¦пробкой. ¦ ¦ ¦5) Стерильные медицинские перчатки. ¦ ¦ ¦6) Стерильные ватные шарики. ¦ ¦ ¦7) 70% этиловый спирт. ¦ ¦ ¦8) Маркер. ¦ ¦ ¦9) Стол. ¦ ¦ ¦10) Антисептики, разрешенные к применению ¦ ¦ ¦Министерством здравоохранения Республики Беларусь ¦ +----------------------+--------------------------------------------------+ ¦5. Методика ¦I. Подготовка к процедуре: ¦ ¦выполнения ¦1. Объяснить пациенту ход и цель процедуры; ¦ ¦процедуры ¦убедиться в наличии у пациента информированного ¦ ¦ ¦согласия на предстоящую процедуру. ¦ ¦ ¦2. Оформить бланк направления для лабораторного ¦ ¦ ¦исследования. ¦ ¦ ¦3. Промаркировать пробирку, предназначенную для ¦ ¦ ¦отбора первичной пробы. ¦ ¦ ¦4. Произвести гигиеническую антисептическую ¦ ¦ ¦обработку рук. ¦ ¦ ¦5. Надеть стерильные медицинские перчатки. ¦ ¦ ¦II. Выполнение процедуры: ¦ ¦ ¦1. В капилляр Панченкова набрать раствор цитрата ¦ ¦ ¦натрия 5% до метки "К" (100 мкл). ¦ ¦ ¦2. 25 мкл раствора цитрата натрия 5% вернуть во ¦ ¦ ¦флакон. ¦ ¦ ¦3. 75 мкл раствора цитрата натрия 5% поместить в ¦ ¦ ¦маркированную пробирку. ¦ ¦ ¦4. Место предполагаемого прокола на пальце ¦ ¦ ¦обработать спиртом этиловым 70% или другим ¦ ¦ ¦антисептиком, разрешенным к применению ¦ ¦ ¦Министерством здравоохранения Республики Беларусь.¦ ¦ ¦5. Место прокола протереть сухим стерильным ватным¦ ¦ ¦шариком. ¦ ¦ ¦6. Произвести прокол скарификатором, первую каплю ¦ ¦ ¦крови удалить стерильным ватным шариком. ¦ ¦ ¦7. Капиллярную кровь в объеме 300 мкл (три ¦ ¦ ¦капилляра) поместить в пробирку с раствором ¦ ¦ ¦цитрата натрия 5%. ¦ ¦ ¦8. Место прокола обработать спиртом этиловым 70% ¦ ¦ ¦или другим антисептиком, прижать к месту прокола ¦ ¦ ¦сухой стерильный ватный шарик. ¦ ¦ ¦9. Закрыть пробирку плотно прилегающей резиновой ¦ ¦ ¦или пластиковой пробкой. ¦ ¦ ¦III. Окончание процедуры: ¦ ¦ ¦1. Подвергнуть дезинфекции расходный материал. ¦ ¦ ¦2. Поместить пробирку в специальный контейнер для ¦ ¦ ¦транспортировки, исключить возможность ее ¦ ¦ ¦опрокидывания. Направления поместить отдельно от ¦ ¦ ¦пробирок. ¦ ¦ ¦3. Снять перчатки, поместить их в емкость для ¦ ¦ ¦дезинфекции. ¦ ¦ ¦4. Произвести гигиеническую антисептическую ¦ ¦ ¦обработку рук. ¦ ¦ ¦5. Транспортировку первичных проб в лабораторию ¦ ¦ ¦произвести в течение 24 часов без предъявления ¦ ¦ ¦требований к температурному режиму ¦ ¦----------------------+--------------------------------------------------- IV. Правила отбора первичной пробы венозной крови: --------------------+------------------------------------------------- ¦1. Наименование ¦Отбор первичной пробы венозной крови ¦ ¦процедуры ¦ ¦ +-------------------+-----------------------------------------------------+ ¦2. Требования к ¦Специалист, имеющий диплом установленного образца об ¦ ¦специалистам ¦окончании среднего специального образовательного ¦ ¦(кто участвует в ¦учебного заведения ¦ ¦выполнении ¦ ¦ ¦процедуры) ¦ ¦ +-------------------+-----------------------------------------------------+ ¦3. Требования к ¦1. Безопасность работы с микроорганизмами III - IV ¦ ¦обеспечению ¦групп патогенности с гельминтами. СП 17-129РБ 2000. ¦ ¦безопасности труда ¦2. Применение ультрафиолетового бактерицидного ¦ ¦медицинского ¦излучения для обеззараживания воздуха и поверхностей ¦ ¦персонала ¦в лечебно-профилактических учреждениях от 01.06.2001 ¦ ¦ ¦N 26-01-01. ¦ ¦ ¦3. Приказ МЗ РБ от 25 ноября 2002 г. N 165 "О ¦ ¦ ¦проведении дезинфекции и стерилизации учреждениями ¦ ¦ ¦здравоохранения". ¦ ¦ ¦4. Методические указания МУ N 90-9908 "Контроль ¦ ¦ ¦качества стерилизации изделий медицинского ¦ ¦ ¦назначения", Минск, 1999 г. ¦ ¦ ¦5. Санитарные правила и нормы 2.1.7.14-20-2005 ¦ ¦ ¦"Правила обращения с медицинскими отходами". ¦ ¦ ¦6. Инструкция 4.2.10-22-1-2006 "Методы ¦ ¦ ¦микробиологического контроля санитарно-гигиенического¦ ¦ ¦состояния помещений в организациях здравоохранения и ¦ ¦ ¦стерильности изделий медицинского назначения" ¦ +-------------------+-----------------------------------------------------+ ¦4. Приборы, ¦1) Одноразовый шприц или вакутайнер. ¦ ¦инструменты, ¦2) Пробирка одноразовая с покрытием для быстрого ¦ ¦изделия ¦образования сыворотки. ¦ ¦медицинского ¦3) Стерильные медицинские перчатки. ¦ ¦назначения ¦4) Жгут. ¦ ¦ ¦5) Стерильные ватные шарики. ¦ ¦ ¦6) Спирт этиловый 70%. ¦ ¦ ¦7) Маркер. ¦ ¦ ¦8) Полуавтоматический дозатор переменного объема. ¦ ¦ ¦9) Наконечники одноразовые к дозатору. ¦ ¦ ¦10) Манипуляционный столик. ¦ ¦ ¦11) Антисептики, разрешенные к применению ¦ ¦ ¦Министерством здравоохранения Республики Беларусь ¦ +-------------------+-----------------------------------------------------+ ¦5. Методика ¦I. Подготовка к процедуре: ¦ ¦выполнения ¦1. Объяснить пациенту ход и цель процедуры; убедиться¦ ¦процедуры ¦в наличии у пациента информированного согласия на ¦ ¦ ¦предстоящую процедуру. ¦ ¦ ¦2. Оформить бланк направления для лабораторного ¦ ¦ ¦исследования. ¦ ¦ ¦3. Промаркировать пробирку, предназначенную для ¦ ¦ ¦отбора первичной пробы, в соответствии с требованиями¦ ¦ ¦лаборатории, где будет проводиться исследование. ¦ ¦ ¦4. Произвести гигиеническую антисептическую обработку¦ ¦ ¦рук. ¦ ¦ ¦5. Надеть стерильные медицинские перчатки. ¦ ¦ ¦II. Выполнение процедуры: <*> ¦ ¦ ¦1. Наложить жгут проксимальнее места венепункции. ¦ ¦ ¦2. Пропальпировать вену перед дезинфекцией места ¦ ¦ ¦венепункции. ¦ ¦ ¦3. Очистить кожу этиловым спиртом 70% или другим ¦ ¦ ¦дезинфицирующим средством, разрешенным к применению ¦ ¦ ¦Министерством здравоохранения Республики Беларусь. ¦ ¦ ¦4. Дать коже высохнуть. ¦ ¦ ¦5. Произвести венепункцию и взятие крови в объеме не ¦ ¦ ¦менее 5 мл. ¦ ¦ ¦6. Извлечь иглу из вены, обработать место венепункции¦ ¦ ¦70% этиловым спиртом или другим антисептиком, ¦ ¦ ¦разрешенным к применению Министерством ¦ ¦ ¦здравоохранения Республики Беларусь. ¦ ¦ ¦7. Место венепункции прижать сухим стерильным ватным ¦ ¦ ¦тампоном. ¦ ¦ ¦8. Кровь из шприца внести в маркированную пробирку, ¦ ¦ ¦выпуская по стенке пробирки медленно, не допуская ¦ ¦ ¦вспенивания и разбрызгивания. ¦ ¦ ¦9. Закрыть пробирку плотно прилегающей резиновой или ¦ ¦ ¦пластиковой пробкой. ¦ ¦ ¦III. Окончание процедуры: ¦ ¦ ¦1. Поместить пробирку в специальный контейнер для ¦ ¦ ¦транспортировки, исключить возможность ее ¦ ¦ ¦опрокидывания. Направления поместить отдельно от ¦ ¦ ¦пробирок. ¦ ¦ ¦2. Подвергнуть дезинфекции расходный материал. ¦ ¦ ¦3. Снять перчатки, поместить их в емкость для ¦ ¦ ¦дезинфекции. ¦ ¦ ¦4. Произвести гигиеническую антисептическую обработку¦ ¦ ¦рук. ¦ ¦ ¦5. Транспортировку первичных проб в лабораторию ¦ ¦ ¦произвести в течение 24 часов при температуре ¦ ¦ ¦+2 - 5 °C. ¦ ¦ ¦6. При необходимости сохранения пробы от 2 до 24 ¦ ¦ ¦часов в процедурном кабинете пробирки с первичными ¦ ¦ ¦пробами поместить в холодильник при температуре ¦ ¦ ¦+2 - 8 °C. ¦ ¦ ¦7. При необходимости сохранения первичной пробы свыше¦ ¦ ¦24 и до 48 часов произвести отделение сыворотки от ¦ ¦ ¦сгустка: первичный образец поместить в термостат при ¦ ¦ ¦температуре +37 °C на 20 - 30 минут, затем в ¦ ¦ ¦холодильник при температуре + 2 - 8 °C на 20 - 30 ¦ ¦ ¦минут, после чего пробирки подвергнуть ¦ ¦ ¦центрифугированию при 1000 - 1500 об/мин в течение ¦ ¦ ¦10 минут. Отделившуюся сыворотку перенести в сухую ¦ ¦ ¦чистую пробирку, предварительно маркированную в ¦ ¦ ¦соответствии с маркировкой первичной пробы. Для ¦ ¦ ¦данной манипуляции использовать отдельный наконечник ¦ ¦ ¦дозатора для каждой пробы. При использовании ¦ ¦ ¦вакутайнера дополнительная обработка первичной пробы ¦ ¦ ¦не проводится. ¦ ¦ ¦8. Пробирку с остатками первичной пробы подвергнуть ¦ ¦ ¦утилизации в соответствии с Санитарными правилами и ¦ ¦ ¦нормами 2.1.7.14-20-2005 "Правила обращения с ¦ ¦ ¦медицинскими отходами" ¦ ¦-------------------+------------------------------------------------------ -------------------------------- <*> У новорожденных детей и детей грудного возраста отбор первичной пробы венозной крови может быть произведен из родничковой или пяточной вены. V. Правила отбора первичной пробы спинномозговой жидкости:---------------------+------------------------------------------------ ¦1. Наименование ¦Отбор первичной пробы спинномозговой жидкости ¦ ¦процедуры ¦ ¦ +--------------------+----------------------------------------------------+ ¦2. Требования к ¦Специалист, имеющий диплом установленного образца об¦ ¦специалистам ¦окончании высшего медицинского образовательного ¦ ¦(кто участвует в ¦учебного заведения ¦ ¦выполнении ¦ ¦ ¦процедуры) ¦ ¦ +--------------------+----------------------------------------------------+ ¦3. Требования к ¦1. Безопасность работы с микроорганизмами III - IV ¦ ¦обеспечению ¦групп патогенности с гельминтами. СП 17-129РБ 2000. ¦ ¦безопасности труда ¦2. Применение ультрафиолетового бактерицидного ¦ ¦медицинского ¦излучения для обеззараживания воздуха и поверхностей¦ ¦персонала ¦в лечебно-профилактических учреждениях от ¦ ¦ ¦01.06.2001 N 26-01-01. ¦ ¦ ¦3. Приказ МЗ РБ от 25 ноября 2002 г. N 165 "О ¦ ¦ ¦проведении дезинфекции и стерилизации учреждениями ¦ ¦ ¦здравоохранения". ¦ ¦ ¦4. Методические указания МУ N 90-9908 "Контроль ¦ ¦ ¦качества стерилизации изделий медицинского ¦ ¦ ¦назначения", Минск, 1999 г. ¦ ¦ ¦5. Санитарные правила и нормы 2.1.7.14-20-2005 ¦ ¦ ¦"Правила обращения с медицинскими отходами". ¦ ¦ ¦Инструкция 4.2.10-22-1-2006 "Методы ¦ ¦ ¦микробиологического контроля санитарно- ¦ ¦ ¦гигиенического состояния помещений в организациях ¦ ¦ ¦здравоохранения и стерильности изделий медицинского ¦ ¦ ¦назначения" ¦ +--------------------+----------------------------------------------------+ ¦4. Приборы, ¦1) Стерильные салфетки и ватные шарики. ¦ ¦инструменты, изделия¦2) Стерильные медицинские перчатки. ¦ ¦медицинского ¦3) Спиртовой раствор йода 5%. ¦ ¦назначения ¦4) Этиловый спирт 70%. ¦ ¦ ¦5) Стерильный пинцет или пластиковые (деревянные) ¦ ¦ ¦палочки. ¦ ¦ ¦6) Стерильные пеленки. ¦ ¦ ¦7) Лоток. ¦ ¦ ¦8) Одноразовый шприц объемом 2 - 5 мл. ¦ ¦ ¦9) Раствор анестетика, разрешенного к применению ¦ ¦ ¦Министерством здравоохранения Республики Беларусь. ¦ ¦ ¦10) Одноразовые иглы с мандренами для проведения ¦ ¦ ¦люмбальной пункции, диаметр 0,5 - 0,6 мм, длина ¦ ¦ ¦8 - 12 см. ¦ ¦ ¦11) Лейкопластырь. ¦ ¦ ¦12) Две пробирки объемом 10 мл с плотно прилегающей ¦ ¦ ¦резиновой или пластиковой пробкой. ¦ ¦ ¦13) Маркер. ¦ ¦ ¦14) Манипуляционный столик ¦ +--------------------+----------------------------------------------------+ ¦5. Методика ¦I. Подготовка к процедуре: ¦ ¦выполнения процедуры¦1. Объяснить пациенту ход и цель процедуры; ¦ ¦ ¦убедиться в наличии у пациента письменного ¦ ¦ ¦информированного согласия на предстоящую процедуру. ¦ ¦ ¦2. Оформить бланк направления для лабораторного ¦ ¦ ¦исследования. ¦ ¦ ¦3. Промаркировать пробирки, предназначенные для ¦ ¦ ¦взятия спинномозговой жидкости. ¦ ¦ ¦4. Произвести гигиеническую антисептическую ¦ ¦ ¦обработку рук. ¦ ¦ ¦5. Надеть стерильные медицинские перчатки. ¦ ¦ ¦II. Выполнение процедуры: ¦ ¦ ¦1. Произвести антисептическую последовательную ¦ ¦ ¦обработку операционного поля спиртовым раствором ¦ ¦ ¦йода 5% и этиловым спиртом 70%, осушить его. ¦ ¦ ¦2. Набрать в одноразовый шприц объемом 2 - 5 мл ¦ ¦ ¦раствор анестетика. ¦ ¦ ¦3. Ввести раствор антисептика внутрикожно до ¦ ¦ ¦образования "лимонной корочки". ¦ ¦ ¦4. Ввести пункционную иглу с мандреном в область ¦ ¦ ¦L4 - L5, L3 - L4. ¦ ¦ ¦5. По достижении субарахноидального пространства ¦ ¦ ¦извлечь мандрен и самотеком набрать по 2,0 - 3,0 мл ¦ ¦ ¦спинномозговой жидкости в каждую из двух плотно ¦ ¦ ¦закрываемых пробирок. ¦ ¦ ¦6. Вставить мандрен в иглу, вывести иглу. ¦ ¦ ¦7. Последовательно обработать операционное поле ¦ ¦ ¦раствором спирта 70% и спиртовым раствором йода 5%. ¦ ¦ ¦8. Наложить стерильную салфетку на место прокола, ¦ ¦ ¦зафиксировать ее лейкопластырем. ¦ ¦ ¦III. Окончание процедуры: ¦ ¦ ¦1. Пробы поместить в специальный контейнер для ¦ ¦ ¦транспортировки, исключив возможность опрокидывания,¦ ¦ ¦и доставить в лабораторию для исследования в течение¦ ¦ ¦не более 15 минут (для определения цитоза ¦ ¦ ¦немедленно). Транспортировку для серологических ¦ ¦ ¦исследований спинномозговой жидкости допустимо ¦ ¦ ¦проводить в течение 2 часов при температуре ¦ ¦ ¦+2 - 25 °C. Направления поместить отдельно от ¦ ¦ ¦пробирок. ¦ ¦ ¦2. В случае проведения процедуры в манипуляционной ¦ ¦ ¦доставить больного под контролем среднего ¦ ¦ ¦медицинского персонала в палату. ¦ ¦ ¦3. Подвергнуть дезинфекции расходный материал. ¦ ¦ ¦4. Снять перчатки, поместить их в емкость для ¦ ¦ ¦дезинфекции. ¦ ¦ ¦5. Произвести гигиеническую антисептическую ¦ ¦ ¦обработку рук ¦ ¦--------------------+----------------------------------------------------- Приложение 4 МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЯ НА TREPONEMA PALLIDUM В ТЕМНОМ ПОЛЕ ЗРЕНИЯ-------------------+-------------------------------------------------- ¦1. Наименование ¦Исследование на Treponema pallidum в темном поле ¦ ¦метода ¦зрения ¦ +------------------+------------------------------------------------------+ ¦2. Принцип метода ¦Визуальная оценка отраженного свечения Treponema ¦ ¦ ¦pallidum на темном поле при боковом освещении ¦ +------------------+------------------------------------------------------+ ¦3. Биологический ¦Серозное отделяемое с поверхности эрозий, язв, ¦ ¦материал для ¦мацерированных, эрозированных, изъязвленных папул или ¦ ¦исследования ¦пустул. ¦ ¦ ¦Пунктат лимфатического узла ¦ +------------------+------------------------------------------------------+ ¦4. Условия ¦Исследование пробы проводят сразу после ее взятия ¦ ¦транспортировки ¦ ¦ ¦проб ¦ ¦ +------------------+------------------------------------------------------+ ¦5. Подготовка проб¦См. приложение 3 "Правила отбора, транспортировки и ¦ ¦к исследованию ¦хранения первичных проб при обследовании пациентов на ¦ ¦ ¦сифилитическую инфекцию" ¦ +------------------+------------------------------------------------------+ ¦6. Оборудование, ¦1) Световой микроскоп, снабженный конденсором темного ¦ ¦инструменты и ¦поля с окуляром X10 - X12 и объективом X40. ¦ ¦материалы ¦2) Источник света мощностью не менее 200 Вт. ¦ ¦ ¦3) Дистиллированная вода. ¦ ¦ ¦4) Пипетка или дозатор для нанесения воды. ¦ ¦ ¦5) Предметное стекло. ¦ ¦ ¦6) Покровное стекло. ¦ ¦ ¦7) Лоток. ¦ ¦ ¦8) Дезинфицирующие средства, разрешенные к применению ¦ ¦ ¦Министерством здравоохранения Республики Беларусь. ¦ ¦ ¦9) Пинцет ¦ +------------------+------------------------------------------------------+ ¦7. Подготовка к ¦Исследование пробы проводят сразу после ее взятия. ¦ ¦проведению анализа¦Подготовка микроскопа: ¦ ¦ ¦- на верхнюю линзу темнопольного конденсора нанести ¦ ¦ ¦каплю дистиллированной воды или каплю масла для ¦ ¦ ¦микроскопии; ¦ ¦ ¦- поместить препарат на столик микроскопа; ¦ ¦ ¦- поднять конденсор, избегая образования пузырьков; ¦ ¦ ¦- включить источник света ¦ +------------------+------------------------------------------------------+ ¦8. Процедура ¦Провести оценку не менее десяти полей зрения ¦ ¦анализа ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ +------------------+------------------------------------------------------+ ¦9. Учет и оценка ¦В темном поле определяются: ¦ ¦результата ¦- нейтрофильные лейкоциты - в виде округлых, ярко ¦ ¦ ¦светящихся зернистых образований; ¦ ¦ ¦- лейкоциты - серовато-темные, тускло светящиеся ¦ ¦ ¦клетки округлой формы; ¦ ¦ ¦- клетки эпителия - круглые или неправильной формы ¦ ¦ ¦клетки, значительно крупнее лейкоцитов и ярко ¦ ¦ ¦светящиеся; ¦ ¦ ¦- эритроциты - в виде темных элементов круглой формы, ¦ ¦ ¦окаймленных светящейся полоской; ¦ ¦ ¦- микроорганизмы, обладающие определенными ¦ ¦ ¦морфологическими характеристиками и характерными ¦ ¦ ¦движениями. ¦ ¦ ¦Во время исследования проводится дифференциальная ¦ ¦ ¦диагностика морфологических признаков Tr. pallidum с ¦ ¦ ¦Tr. refringers, Tr. phagedenis, Tr. denticola, Tr. ¦ ¦ ¦microdentium, Tr. buccalis, Tr. vincenti. ¦ ¦ ¦Характеристика Tr. pallidum: ¦ ¦ ¦- тонкая спираль, длиной 6 - 20 мкм, толщиной 0,13 - ¦ ¦ ¦0,15 мкм, с равномерными 10 - 13 (6 - 20) завитками, с¦ ¦ ¦характерными сгибательными, маятникообразными, ¦ ¦ ¦вращательными и плавными поступательными движениями. ¦ ¦ ¦Характеристика Tr. refringers: ¦ ¦ ¦- спираль длиной 5 - 8 мкм, толщиной 0,2 - 0,3 мкм, с ¦ ¦ ¦2 - 3 завитками, с быстрыми поступательными, очень ¦ ¦ ¦быстрыми вращательными, выраженными волнообразными ¦ ¦ ¦движениями, отсутствием сгибательных и ¦ ¦ ¦маятникообразных движений. ¦ ¦ ¦Характеристика Tr. phagedenis: ¦ ¦ ¦- спираль длиной 10 - 12 мкм, толщиной 0,2 - 0,25 мкм,¦ ¦ ¦с 10 - 12 (10 - 30) завитками, с медленными ¦ ¦ ¦свободными, с резкими толчками поступательными ¦ ¦ ¦движениями, внезапно переходящими от медленных к ¦ ¦ ¦быстрым вращениям на месте, колебательными движениями ¦ ¦ ¦с резкими толчками, отсутствием сгибательных и ¦ ¦ ¦маятникообразных движений. ¦ ¦ ¦Характеристика Tr. denticola: ¦ ¦ ¦- спираль длиной 8 (6 - 16) мкм, толщиной 0,15 - 0,2 ¦ ¦ ¦мкм, с 6 - 8 (6 - 16) завитками, с медленными ¦ ¦ ¦свободными поступательными, с резкими толчками, ¦ ¦ ¦мягкими, крутящимися, колебательными движениями, ¦ ¦ ¦отсутствием сгибательных и маятникообразных движений. ¦ ¦ ¦Характеристика Tr. microdentium: ¦ ¦ ¦- спираль длиной 5 - 10 мкм, толщиной 0,2 - 0,3 мкм ¦ ¦ ¦(короче и толще бледной трепонемы), сильнее преломляет¦ ¦ ¦свет, имеет заостренные завитки, перемещается ¦ ¦ ¦медленнее без сгибательных движений. ¦ ¦ ¦Характеристика Tr. buccalis: ¦ ¦ ¦- спираль имеет от 3 до 10 широких неравномерных ¦ ¦ ¦завитков, сильно преломляет свет, активно двигается. ¦ ¦ ¦Характеристика Tr. vincenti: ¦ ¦ ¦- спираль с 2 - 3 плоскими неравномерными завитками, ¦ ¦ ¦тонкая и нежная, движется активно, хаотично, ярко ¦ ¦ ¦светится. ¦ ¦ ¦Образец заключения: "Tr. pallidum обнаружена" и "Tr. ¦ ¦ ¦pallidum не обнаружена" ¦ +------------------+------------------------------------------------------+ ¦10. Контроль ¦На преаналитическом этапе оцениваются: ¦ ¦качества ¦- взятие первичной пробы; ¦ ¦ ¦- правильность маркировки первичной пробы; ¦ ¦ ¦- исправность микроскопа; ¦ ¦ ¦- соответствие показателей внешней среды: температуры ¦ ¦ ¦воздуха, влажности, освещенности рабочего места, тем ¦ ¦ ¦условиям, которые необходимы для проведения ¦ ¦ ¦исследования. ¦ ¦ ¦На аналитическом этапе оценивается: ¦ ¦ ¦- выполнение методики исследования в соответствии с ¦ ¦ ¦инструкцией. ¦ ¦ ¦На постаналитическом этапе оцениваются: ¦ ¦ ¦- правильность внесения результатов в бланк ¦ ¦ ¦исследования; ¦ ¦ ¦- своевременное доведение информации до врача, ¦ ¦ ¦назначившего исследование ¦ +------------------+------------------------------------------------------+ ¦11. Нормативные ¦1. Безопасность работы с микроорганизмами III - IV ¦ ¦ссылки ¦групп патогенности с гельминтами. СП 17-129РБ 2000. ¦ ¦ ¦2. Применение ультрафиолетового бактерицидного ¦ ¦ ¦излучения для обеззараживания воздуха и поверхностей в¦ ¦ ¦лечебно-профилактических учреждениях от 01.06.2001 N ¦ ¦ ¦26-01-01. ¦ ¦ ¦3. Приказ МЗ РБ от 25 ноября 2002 г. N 165 "О ¦ ¦ ¦проведении дезинфекции и стерилизации учреждениями ¦ ¦ ¦здравоохранения". ¦ ¦ ¦4. Методические указания МУ N 90-9908 "Контроль ¦ ¦ ¦качества стерилизации изделий медицинского ¦ ¦ ¦назначения", Минск, 1999 г. ¦ ¦ ¦5. Санитарные правила и нормы 2.1.7.14-20-2005 ¦ ¦ ¦"Правила обращения с медицинскими отходами". ¦ ¦ ¦6. Инструкция 4.2.10-22-1-2006 "Методы ¦ ¦ ¦микробиологического контроля санитарно-гигиенического ¦ ¦ ¦состояния помещений в организациях здравоохранения и ¦ ¦ ¦стерильности изделий медицинского назначения". ¦ ¦ ¦7. Приказ МЗ РБ N 351 от 16.12.1998 "О пересмотре ¦ ¦ ¦ведомственных нормативных актов, регламентирующих ¦ ¦ ¦вопросы по проблеме ВИЧ/СПИД". ¦ ¦ ¦8. Инструкция N 113-0801 от 05.09.2001 "Гигиеническая ¦ ¦ ¦и хирургическая антисептика кожи рук медицинского ¦ ¦ ¦персонала". ¦ ¦ ¦9. Постановление Главного государственного ¦ ¦ ¦санитарного врача РБ N 71 от 11.07.2003 "Об ¦ ¦ ¦утверждении и введении санитарных правил устройства, ¦ ¦ ¦содержания и эксплуатации ЛПО" ¦ +------------------+------------------------------------------------------+ ¦12. Безопасность ¦В соответствии с требованиями нормативных документов ¦ ¦персонала ¦ ¦ ¦------------------+------------------------------------------------------- Приложение 5 МЕТОДИКА РЕАКЦИИ МИКРОПРЕЦИПИТАЦИИ С КАРДИОЛИПИНОВЫМ АНТИГЕНОМ <*>-------------------+-------------------------------------------------- ¦1. Наименование ¦Реакция микропреципитации с кардиолипиновым антигеном ¦ ¦метода ¦(РМП) ¦ +------------------+------------------------------------------------------+ ¦2. Принцип метода ¦Образование комплекса антиген-антитело при ¦ ¦ ¦взаимодействии сыворотки, плазмы, СМЖ больного ¦ ¦ ¦сифилисом и эмульсии кардиолипинового антигена, ¦ ¦ ¦имеющего вид преципитата белого цвета ¦ +------------------+------------------------------------------------------+ ¦3. Биологический ¦Нативная инактивированная сыворотка крови. ¦ ¦материал для ¦Спинномозговая жидкость (СМЖ). ¦ ¦исследования ¦Плазма крови ¦ +------------------+------------------------------------------------------+ ¦4. Условия ¦Пробирки с кровью, сывороткой, плазмой, СМЖ ¦ ¦транспортировки ¦транспортируются в лабораторию в специальном закрытом ¦ ¦проб ¦контейнере при температуре +2 - 25 °C. При ¦ ¦ ¦невозможности немедленной доставки пробы в ¦ ¦ ¦лабораторию пробы хранятся в холодильнике при ¦ ¦ ¦температуре +2 - 8 °C не более 24 часов. ¦ ¦ ¦В лаборатории пробы исследуются в течение 24 часов, ¦ ¦ ¦при необходимости сохранения образца до 72 часов ¦ ¦ ¦отделяется сыворотка и хранится при температуре ¦ ¦ ¦+2 - 8 °C. При необходимости хранения биологического ¦ ¦ ¦материала в течение более длительных сроков производят¦ ¦ ¦замораживание сыворотки, СМЖ при разделении его на ¦ ¦ ¦несколько дублирующих проб по 0,5 - 1,0 мл в ¦ ¦ ¦маркированных пробирках типа Эппендорф. Замораживание ¦ ¦ ¦при температуре -18 - 20 °C позволяет хранить образцы ¦ ¦ ¦в течение 1 - 1,5 месяцев, при низких температурах ¦ ¦ ¦-70 °C срок их хранения практически не лимитируется. ¦ ¦ ¦Образцы с плазмой исследуются в день взятия, хранению ¦ ¦ ¦не подлежат ¦ +------------------+------------------------------------------------------+ ¦5. Подготовка проб¦Для получения сыворотки образцы крови помещаются в ¦ ¦к исследованию ¦термостат при +37 °C на 15 - 30 минут или оставляются ¦ ¦ ¦при комнатной температуре для образования сгустка ¦ ¦ ¦фибрина, затем помещаются в холодильник при +4 °C на ¦ ¦ ¦30 минут, после чего пробирки с венозной кровью ¦ ¦ ¦подвергаются центрифугированию в течение 10 минут при ¦ ¦ ¦скорости вращения ротора 1000 - 3000 оборотов в ¦ ¦ ¦минуту. Сыворотка переносится в другую пробирку для ¦ ¦ ¦последующего тестирования. Оттаивание сыворотки крови ¦ ¦ ¦для проведения исследования производится при комнатной¦ ¦ ¦температуре или при температуре +2 - 8 °C бытового ¦ ¦ ¦холодильника. Для гомогенизации содержимого пробирки ¦ ¦ ¦после оттаивания его в обязательном порядке несколько ¦ ¦ ¦раз тщательно перемешиваются перед выполнением ¦ ¦ ¦исследования. ¦ ¦ ¦Образцы, в которых сформирован кровяной сгусток и ¦ ¦ ¦достаточное количество сыворотки, могут быть ¦ ¦ ¦исследованы без подготовки. ¦ ¦ ¦Перед проведением исследования образцы сыворотки ¦ ¦ ¦подвергают инактивированию при +56 °C в течение 30 ¦ ¦ ¦минут. ¦ ¦ ¦Пробирки со стабилизированной кровью (плазма) в ¦ ¦ ¦лаборатории отстаивают перед исследованием при ¦ ¦ ¦комнатной температуре в течение 30 - 60 минут или ¦ ¦ ¦центрифугируют 7 - 10 минут при скорости вращения ¦ ¦ ¦1000 - 1500 оборотов в минуту. ¦ ¦ ¦Подготовка проб СМЖ не проводится ¦ +------------------+------------------------------------------------------+ ¦6. Оборудование, ¦1) Набор для РМП. ¦ ¦инструменты и ¦2) Круглодонный иммунологический планшет для ¦ ¦материалы ¦макротитрования. ¦ ¦ ¦3) Дозаторы пипеточные переменного объема, ¦ ¦ ¦позволяющие отбирать 50 мкл, 150 мкл, 2 мл и 10 мл ¦ ¦ ¦жидкости. ¦ ¦ ¦4) Наконечники для дозатора универсальные. ¦ ¦ ¦5) Пробирки (стеклянные или одноразовые). ¦ ¦ ¦6) Физиологический раствор. ¦ ¦ ¦7) Шейкер (орбитальный ротор). ¦ ¦ ¦8) Центрифуга с горизонтальным ротором, развивающая ¦ ¦ ¦ускорение 1000 - 3000 оборотов в минуту. ¦ ¦ ¦9) Источник искусственного направленного света. ¦ ¦ ¦10) Стаканы мерные химические. ¦ ¦ ¦11) Вата медицинская гигроскопическая. ¦ ¦ ¦12) Перекись водорода. ¦ ¦ ¦13) Контейнеры для сбора твердых и жидких отходов. ¦ ¦ ¦14) Маркер. ¦ ¦ ¦15) Средства индивидуальной защиты персонала ¦ +------------------+------------------------------------------------------+ ¦7. Реагенты ¦Набор для РМП: ¦ ¦ ¦- спиртовой раствор кардиолипинового антигена ¦ ¦ ¦(холестерин - 0,98%, кардиолипин - 0,03%, лецитин - ¦ ¦ ¦0,27% в абсолютизированном этиловом спирте); ¦ ¦ ¦- холинхлорид 70%; ¦ ¦ ¦- 0,9% раствор хлорида натрия (физиологический ¦ ¦ ¦раствор) ¦ +------------------+------------------------------------------------------+ ¦8. Подготовка к ¦Перед использованием компоненты набора выдержать при ¦ ¦проведению анализа¦температуре +18 - 27 °С в течение 30 минут. ¦ ¦ ¦В случае выпадения кристаллов во флаконах с раствором ¦ ¦ ¦холинхлорида прогреть их при температуре +37 +/- 1 °C ¦ ¦ ¦до полного растворения кристаллов, после чего флаконы ¦ ¦ ¦интенсивно встряхнуть. ¦ ¦ ¦Приготовление эмульсии кардиолипинового антигена: ¦ ¦ ¦- в пробирку внести 2,0 мл свежеприготовленного ¦ ¦ ¦физиологического раствора, затем добавить равное ¦ ¦ ¦количество спиртового раствора антигена ¦ ¦ ¦кардиолипинового для РМП, быстро и тщательно ¦ ¦ ¦перемешать содержимое пробирки. При смешивании раствор¦ ¦ ¦становится непрозрачным, образуются хлопья белого ¦ ¦ ¦цвета; ¦ ¦ ¦- смесь оставить при температуре +20 °C на 30 минут; ¦ ¦ ¦- для осаждения липидов смесь центрифугировать при ¦ ¦ ¦1500 оборотов в минуту в течение 15 минут; ¦ ¦ ¦- надосадочную жидкость удалить; ¦ ¦ ¦- к 30,0 мл изотонического раствора хлорида натрия ¦ ¦ ¦добавить 5 мл 70% раствора холинхлорида. Раствор ¦ ¦ ¦перемешать и использовать в течение 2 недель, хранить ¦ ¦ ¦при температуре +2 - 8 °C; ¦ ¦ ¦- к осадку антигена кардиолипинового добавить 7 мл ¦ ¦ ¦приготовленного раствора холинхлорида и тщательно ¦ ¦ ¦перемешать; ¦ ¦ ¦- готовую эмульсию кардиолипинового антигена хранить ¦ ¦ ¦при температуре +2 - 8 °C без доступа света, ¦ ¦ ¦использовать в течение срока, указанного ¦ ¦ ¦производителем. ¦ ¦ ¦Для приготовления большего количества эмульсии ¦ ¦ ¦рекомендуется ее готовить не в одной пробирке или ¦ ¦ ¦большом флаконе, а в нескольких пробирках, внося в ¦ ¦ ¦каждую из них по 2 мл антигена. ¦ ¦ ¦В иных случаях необходимо следовать инструкции ¦ ¦ ¦производителя ¦ +------------------+------------------------------------------------------+ ¦9. Процедура ¦Планшет для макротитрования размечается для проведения¦ ¦анализа ¦анализа, для каждой пробы выделяется 1 лунка. ¦ ¦ ¦Качественный вариант: ¦ ¦ ¦В лунку планшета для макротитрования внести по 150 мкл¦ ¦ ¦исследуемых образцов и добавить 50 мкл эмульсии ¦ ¦ ¦кардиолипинового антигена. Перед использованием ¦ ¦ ¦эмульсию кардиолипинового антигена тщательно ¦ ¦ ¦ресуспензировать. Содержимое планшета тщательно ¦ ¦ ¦перемешать путем встряхивания на шейкере в течение 5 ¦ ¦ ¦минут. В каждую лунку добавить 150 мкл изотонического ¦ ¦ ¦раствора хлорида натрия, перемешать. Учет реакции ¦ ¦ ¦проводить через 5 минут. ¦ ¦ ¦Все образцы биологического материала, показавшие при ¦ ¦ ¦скрининге положительные результаты, необходимо ¦ ¦ ¦исследовать в количественном варианте РМП. ¦ ¦ ¦Количественный вариант: ¦ ¦ ¦- в лунки иммунологического планшета со 2-й по 8-ю ¦ ¦ ¦(10-ю) вносят по 150 мкл свежеприготовленного ¦ ¦ ¦физиологического раствора хлорида натрия; ¦ ¦ ¦- в 1-ю и 2-ю лунки ряда вносят по 150 мкл ¦ ¦ ¦исследуемого образца биологического материала. ¦ ¦ ¦Многократным пипетированием во второй лунке ¦ ¦ ¦перемешивают содержимое и переносят 150 мкл ¦ ¦ ¦полученного разведения (1:2) в третью лунку; ¦ ¦ ¦- данную операцию повторяют во всех лунках ряда, по ¦ ¦ ¦окончании разведения из последней лунки избыток ¦ ¦ ¦материала 150 мкл удаляют; таким образом, получают ¦ ¦ ¦серию разведений: от цельного биологического материала¦ ¦ ¦к 1:2, 1:4, ... и до 1:128 (8-я лунка) или 1:512 (10-я¦ ¦ ¦лунка); ¦ ¦ ¦- во все лунки каждого ряда добавляют по 50 мкл хорошо¦ ¦ ¦ресуспензированной эмульсии кардиолипинового антигена,¦ ¦ ¦помещают планшет для постоянного перемешивания на ¦ ¦ ¦горизонтальную площадку орбитального шейкера на 5 ¦ ¦ ¦минут. По окончании процедуры во все лунки вносят по ¦ ¦ ¦150 мкл физиологического раствора и через 5 минут ¦ ¦ ¦учитывают результаты исследования ¦ +------------------+------------------------------------------------------+ ¦10. Учет и оценка ¦Учет результатов производится в проходящем свете при ¦ ¦результата ¦освещенности не ниже 300 люкс по наличию в реакционной¦ ¦ ¦смеси преципитатов (хлопьев) белого цвета по системе ¦ ¦ ¦"четырех плюсов": ¦ ¦ ¦- крупные хлопья преципитата белого цвета ¦ ¦ ¦распределяются равномерно по всему объему лунки либо ¦ ¦ ¦имеют тенденцию к расположению по периферической части¦ ¦ ¦лунки, при этом реакционная среда полностью прозрачная¦ ¦ ¦- результат "резко положительный 4+"; ¦ ¦ ¦- хлопья средней величины распределены по всему объему¦ ¦ ¦лунки, реакционная среда практически прозрачна - ¦ ¦ ¦результат "положительный 3+"; ¦ ¦ ¦- мелкие хлопья преципитата распределены по объему ¦ ¦ ¦лунки, реакционная среда имеет белесоватый оттенок - ¦ ¦ ¦результат "слабоположительный - 2+ или 1+"; ¦ ¦ ¦- наличие очень мелких хлопьев, сомнение в наличии ¦ ¦ ¦преципитата; при покачивании планшета частицы антигена¦ ¦ ¦демонстрируют перламутровые переливы реакционной среды¦ ¦ ¦- результат "сомнительный"; ¦ ¦ ¦- преципитата нет, реакционная среда непрозрачная, при¦ ¦ ¦покачивании планшета частицы кардиолипинового антигена¦ ¦ ¦перемещаются, формируя перламутровые переливы белого ¦ ¦ ¦цвета в центре лунки, - результат "отрицательный". ¦ ¦ ¦Учет количественного варианта реакции производят по ¦ ¦ ¦стандартной методике. При этом титром антител считают ¦ ¦ ¦последнее разведение, где обнаружен преципитат ¦ +------------------+------------------------------------------------------+ ¦11. Контроль ¦На преаналитическом этапе оцениваются: ¦ ¦качества ¦- взятие биологического материала в соответствии с ¦ ¦ ¦требованиями; ¦ ¦ ¦- выполнение требований хранения и доставки материала ¦ ¦ ¦в лабораторию; ¦ ¦ ¦- выполнение требований маркировки проб и соответствия¦ ¦ ¦маркировки пробы маркировке направления; ¦ ¦ ¦- качество биологического материала. Запрещается ¦ ¦ ¦тестирование гемолизированных, гиперлипидемичных ¦ ¦ ¦(хилезных), гипербилирубинемичных (желтушных) ¦ ¦ ¦образцов; ¦ ¦ ¦- контроль диагностикума (внешнее состояние, срок ¦ ¦ ¦годности), условия и сроки хранения; ¦ ¦ ¦- соответствие показателей внешней среды: температура ¦ ¦ ¦воздуха, влажность; ¦ ¦ ¦- качество лабораторной посуды. ¦ ¦ ¦На аналитическом этапе оцениваются: ¦ ¦ ¦- включение официально зарегистрированных контрольных ¦ ¦ ¦материалов с различным уровнем активности ¦ ¦ ¦(отрицательные, положительные, слабоположительные ¦ ¦ ¦сыворотки); ¦ ¦ ¦- соблюдение температурного режима и времени ¦ ¦ ¦инактивирования образца; ¦ ¦ ¦- исполнение методики постановки в соответствии с ¦ ¦ ¦инструкцией производителя; ¦ ¦ ¦- учет результатов с контрольным материалом и ¦ ¦ ¦испытуемым образцом в соответствии с официально ¦ ¦ ¦признанными критериями. ¦ ¦ ¦На постаналитическом этапе оценивается: ¦ ¦ ¦- правильность внесения результатов в бланк ¦ ¦ ¦исследования; ¦ ¦ ¦- своевременное доведение информации до врача, ¦ ¦ ¦назначившего исследование ¦ +------------------+------------------------------------------------------+ ¦12. Нормативные ¦1. Безопасность работы с микроорганизмами III - IV ¦ ¦ссылки ¦групп патогенности с гельминтами. СП 17-129РБ 2000. ¦ ¦ ¦2. Применение ультрафиолетового бактерицидного ¦ ¦ ¦излучения для обеззараживания воздуха и поверхностей в¦ ¦ ¦лечебно-профилактических учреждениях от 01.06.2001 N ¦ ¦ ¦26-01-01. ¦ ¦ ¦3. Приказ МЗ РБ от 25 ноября 2002 г. N 165 "О ¦ ¦ ¦проведении дезинфекции и стерилизации учреждениями ¦ ¦ ¦здравоохранения". ¦ ¦ ¦4. Методические указания МУ N 90-9908 "Контроль ¦ ¦ ¦качества стерилизации изделий медицинского ¦ ¦ ¦назначения", Минск, 1999 г. ¦ ¦ ¦5. Санитарные правила и нормы 2.1.7.14-20-2005 ¦ ¦ ¦"Правила обращения с медицинскими отходами". ¦ ¦ ¦6. Инструкция 4.2.10-22-1-2006 "Методы ¦ ¦ ¦микробиологического контроля санитарно-гигиенического ¦ ¦ ¦состояния помещений в организациях здравоохранения и ¦ ¦ ¦стерильности изделий медицинского назначения". ¦ ¦ ¦7. Приказ МЗ РБ N 351 от 16.12.1998 "О пересмотре ¦ ¦ ¦ведомственных нормативных актов, регламентирующих ¦ ¦ ¦вопросы по проблеме ВИЧ/СПИД". ¦ ¦ ¦8. Инструкция N 113-0801 от 05.09.2001 "Гигиеническая ¦ ¦ ¦и хирургическая антисептика кожи рук медицинского ¦ ¦ ¦персонала". ¦ ¦ ¦9. Постановление Главного государственного ¦ ¦ ¦санитарного врача РБ N 71 от 11.07.2003 "Об ¦ ¦ ¦утверждении и введении санитарных правил устройства, ¦ ¦ ¦содержания и эксплуатации ЛПО" ¦ +------------------+------------------------------------------------------+ ¦13. Безопасность ¦В соответствии с требованиями нормативных документов ¦ ¦персонала ¦ ¦ ¦------------------+------------------------------------------------------- -------------------------------- <*> Описана типовая процедура. Если в инструкции производителя указаны иные требования к отбору, хранению и транспортировке проб, процедуре анализа и учету результатов, то необходимо следовать инструкции производителя. Приложение 6 МЕТОДИКА РЕАКЦИИ БЫСТРЫХ ПЛАЗМЕННЫХ РЕАГИНОВ <*>-------------------+-------------------------------------------------- ¦1. Наименование ¦Реакция быстрых плазменных реагинов (RPR) ¦ ¦метода ¦ ¦ +------------------+------------------------------------------------------+ ¦2. Принцип метода ¦Образование комплекса "антиген-антитело", имеющего вид¦ ¦ ¦флоккулята черного цвета, при взаимодействии ¦ ¦ ¦сыворотки, плазмы или СМЖ больного сифилисом и ¦ ¦ ¦суспензии кардиолипинового антигена с древесным углем ¦ +------------------+------------------------------------------------------+ ¦3. Биологический ¦Нативная сыворотка крови. ¦ ¦материал для ¦Плазма крови. ¦ ¦исследования ¦Спинномозговая жидкость (СМЖ) ¦ +------------------+------------------------------------------------------+ ¦4. Условия ¦Пробирки с кровью, сывороткой, плазмой, СМЖ ¦ ¦транспортировки ¦транспортируются в лабораторию в специальном закрытом ¦ ¦проб ¦контейнере при температуре +2 - 25 °C. При ¦ ¦ ¦невозможности немедленной доставки пробы хранятся в ¦ ¦ ¦холодильнике при температуре +2 - 8 °C не более ¦ ¦ ¦24 часов. ¦ ¦ ¦В лаборатории первичные пробы исследуются в течение 24¦ ¦ ¦часов. При необходимости сохранения пробы до 72 часов ¦ ¦ ¦отделяется сыворотка и хранится при температуре ¦ ¦ ¦+2 - 8 °C. ¦ ¦ ¦При необходимости хранения проб в течение более ¦ ¦ ¦длительных сроков в лаборатории производят их ¦ ¦ ¦замораживание в маркированных пробирках типа ¦ ¦ ¦Эппендорф, предварительно разделив первичную пробу на ¦ ¦ ¦несколько дублирующих по 0,5 - 1,0 мл. Замораживание ¦ ¦ ¦при температуре -18 - 20 °C позволяет хранить пробы в ¦ ¦ ¦течение 1 - 1,5 месяцев; при температуре -70 °C срок ¦ ¦ ¦хранения не лимитируется. ¦ ¦ ¦Образцы с плазмой исследуются в день взятия, хранению ¦ ¦ ¦не подлежат ¦ +------------------+------------------------------------------------------+ ¦5. Подготовка проб¦Образцы крови помещают в термостат при +37 °C на 15 - ¦ ¦к исследованию ¦30 минут или оставляют при комнатной температуре для ¦ ¦ ¦образования сгустка фибрина, затем помещают в ¦ ¦ ¦холодильник при +2 - 8 °C на 30 минут, после чего ¦ ¦ ¦пробирки с венозной кровью подвергают ¦ ¦ ¦центрифугированию в течение 10 минут при скорости ¦ ¦ ¦вращения ротора 1000 - 1500 оборотов в минуту. ¦ ¦ ¦Сыворотка переносится в другую пробирку для ¦ ¦ ¦последующего тестирования. Оттаивание сыворотки крови ¦ ¦ ¦для проведения исследования производят при комнатной ¦ ¦ ¦температуре или при температуре +2 - 8 °C бытового ¦ ¦ ¦холодильника. Перед выполнением исследования после ¦ ¦ ¦оттаивания для гомогенизации содержимого пробирки его ¦ ¦ ¦несколько раз тщательно перемешивают. ¦ ¦ ¦Перед проведением исследования образцы сыворотки могут¦ ¦ ¦быть инактивированы при +56 °C в течение 30 минут или ¦ ¦ ¦исследоваться без предварительной инактивации в ¦ ¦ ¦зависимости от требований производителя. ¦ ¦ ¦Пробирки со стабилизированной кровью (плазма) в ¦ ¦ ¦лаборатории отстаивают перед исследованием при ¦ ¦ ¦комнатной температуре в течение 30 - 60 минут или ¦ ¦ ¦центрифугируют 7 - 10 минут при скорости вращения ¦ ¦ ¦1000 - 1500 оборотов в минуту. ¦ ¦ ¦Подготовка проб СМЖ не проводится ¦ +------------------+------------------------------------------------------+ ¦6. Оборудование, ¦1) Набор для RPR. ¦ ¦инструменты и ¦2) Дозаторы пипеточные переменного объема, ¦ ¦материалы ¦позволяющие отбирать 50 мкл, 16 мкл жидкости. ¦ ¦ ¦3) Наконечники для дозатора универсальные. ¦ ¦ ¦4) Пластиковые палочки, если они не входят в состав ¦ ¦ ¦набора. ¦ ¦ ¦5) Маркер. ¦ ¦ ¦6) Пробирки (стеклянные или одноразовые). ¦ ¦ ¦7) Орбитальный ротор. ¦ ¦ ¦8) Центрифуга с горизонтальным ротором, развивающая ¦ ¦ ¦ускорение 1000 - 3000 оборотов в минуту. ¦ ¦ ¦9) Перекись водорода. ¦ ¦ ¦10) Контейнеры для сбора твердых и жидких отходов. ¦ ¦ ¦11) Средства индивидуальной защиты персонала. ¦ ¦ ¦12) Дезинфицирующие растворы, разрешенные к применению¦ ¦ ¦Министерством здравоохранения Республики Беларусь ¦ +------------------+------------------------------------------------------+ ¦7. Реагенты ¦Набор для RPR: ¦ ¦ ¦- готовая к применению суспензия кардиолипинового ¦ ¦ ¦антигена, сорбированного на мелкодисперсных частицах ¦ ¦ ¦угля; ¦ ¦ ¦- положительная контрольная сыворотка ¦ ¦ ¦(стабилизированная инактивированной сывороткой крови ¦ ¦ ¦человека); ¦ ¦ ¦- отрицательная контрольная сыворотка ¦ ¦ ¦(стабилизированная инактивированной сывороткой крови ¦ ¦ ¦человека); ¦ ¦ ¦- картонные или пластиковые карточки с выдавленными ¦ ¦ ¦неглубокими (18 мм) лунками для проведения в них ¦ ¦ ¦реакции; ¦ ¦ ¦- диспенсор со съемной иглой для дозированного ¦ ¦ ¦раскапывания суспензии антигена; ¦ ¦ ¦- пластиковые палочки для распределения пробы по ¦ ¦ ¦поверхности карточки ¦ +------------------+------------------------------------------------------+ ¦8. Подготовка к ¦Перед использованием компоненты набора выдержать при ¦ ¦проведению анализа¦температуре +18 - 27 °C в течение 30 минут. ¦ ¦ ¦Произвести маркировку карточки, предназначенной для ¦ ¦ ¦выполнения исследования. ¦ ¦ ¦Ампулу (флакон) с кардиолипиновым антигеном тщательно ¦ ¦ ¦встряхнуть, при необходимости перелить содержимое в ¦ ¦ ¦диспенсер, надеть дозирующую иглу ¦ +------------------+------------------------------------------------------+ ¦9. Процедура ¦Качественный вариант: ¦ ¦анализа ¦- пипеточным дозатором набрать по 50 мкл контрольных и¦ ¦ ¦испытуемых проб сыворотки (плазмы крови или ¦ ¦ ¦спинномозговой жидкости) и внести в соответствующую ¦ ¦ ¦лунку карточки; ¦ ¦ ¦- этим же наконечником или индивидуальной пластиковой ¦ ¦ ¦палочкой распределить образец биологического материала¦ ¦ ¦внутри очерченной зоны лунки; ¦ ¦ ¦- наконечник и палочку сбросить в емкость с ¦ ¦ ¦дезинфицирующим раствором; ¦ ¦ ¦- в каждую лунку добавить по одной капле (или по 16 ¦ ¦ ¦мкл) хорошо ресуспензированного кардиолипинового ¦ ¦ ¦антигена; ¦ ¦ ¦- карточку поместить на платформу горизонтального ¦ ¦ ¦шейкера (ротора) для постоянного перемешивания ¦ ¦ ¦содержимого лунок в течение 8 минут при скорости ¦ ¦ ¦вращения 150 оборотов в минуту; ¦ ¦ ¦- через 8 минут приступить к учету результатов ¦ ¦ ¦реакции. ¦ ¦ ¦Количественный вариант: ¦ ¦ ¦- в количественном варианте исследуются все пробы, ¦ ¦ ¦показавшие при скрининге положительные или ¦ ¦ ¦слабоположительные результаты; ¦ ¦ ¦- в лунки карточки со 2-й по 5-ю (для проб со ¦ ¦ ¦слабоположительным результатом качественного ¦ ¦ ¦исследования) или 10-ю внести по 50 мкл ¦ ¦ ¦свежеприготовленного изотонического раствора натрия ¦ ¦ ¦хлорида; ¦ ¦ ¦- в первую и вторую лунки карточки внести по 50 мкл ¦ ¦ ¦исследуемого образца биологического материала; ¦ ¦ ¦- многократным пипетированием во второй лунке ¦ ¦ ¦перемешать содержимое, стараясь избежать образования ¦ ¦ ¦пены; ¦ ¦ ¦- перенести 50 мкл полученного разведения (1:2) в ¦ ¦ ¦третью лунку; ¦ ¦ ¦- данную операцию повторять последовательно во всех ¦ ¦ ¦лунках карточки, из последней лунки 50 мкл удалить в ¦ ¦ ¦емкость с дезинфицирующим раствором (получают серию ¦ ¦ ¦разведений: от цельного биологического материала к ¦ ¦ ¦1:2, 1:4, ... до 1:16 (5-я лунка) или до 1:512 (10-я ¦ ¦ ¦лунка)); ¦ ¦ ¦- во все лунки карточки добавить по 16 мкл хорошо ¦ ¦ ¦ресуспензированной суспензии кардиолипинового ¦ ¦ ¦антигена, поместить планшет для постоянного ¦ ¦ ¦перемешивания на горизонтальную площадку орбитального ¦ ¦ ¦шейкера на 8 минут ¦ +------------------+------------------------------------------------------+ ¦10. Учет и оценка ¦Карточку расположить на столе или держать в руках и ¦ ¦результата ¦слегка покачивать, учет результатов производится ¦ ¦ ¦визуально (для более четкой регистрации разрешается ¦ ¦ ¦применять лупу двукратного увеличения). ¦ ¦ ¦Произвести оценку результатов с положительным и ¦ ¦ ¦отрицательным контролями. При несоответствии ¦ ¦ ¦результатов исследования контролей заявленным ¦ ¦ ¦производителем набора результаты исследования ¦ ¦ ¦аналитической серии регистрации не подлежат, тест ¦ ¦ ¦провести заново. ¦ ¦ ¦Критерием позитивности является образование в ¦ ¦ ¦исследуемой реакционной смеси частиц флоккулята ¦ ¦ ¦различной величины и просветления реакционной среды: ¦ ¦ ¦- крупные и средней величины агрегаты угольных частиц ¦ ¦ ¦черного цвета располагаются по всему объему лунки, ¦ ¦ ¦имеют тенденцию к расположению ближе к периферической ¦ ¦ ¦части лунки, реакционная среда практически полностью ¦ ¦ ¦прозрачная - результат "положительный"; ¦ ¦ ¦- редкие и мелкие агрегаты угольных частиц, хлопья ¦ ¦ ¦преципитата распределены по периферии реакционной ¦ ¦ ¦лунки, реакционная среда имеет гомогенную структуру - ¦ ¦ ¦результат "слабоположительный"; ¦ ¦ ¦- видимые агрегаты угольных частиц в пробе ¦ ¦ ¦отсутствуют, реакционная среда гомогенной структуры ¦ ¦ ¦либо частицы угля собираются в центральной части ¦ ¦ ¦лунки, формируя пятно черного цвета, - результат ¦ ¦ ¦"отрицательный". ¦ ¦ ¦Учет результатов количественного варианта производят ¦ ¦ ¦по стандартной методике. Титром антител считают ¦ ¦ ¦последнее разведение, показавшее положительный ¦ ¦ ¦результат при RPR-тестировании. ¦ ¦ ¦Если производителем предусмотрена оценка позитивности ¦ ¦ ¦по системе плюсов "+", необходимо следовать инструкции¦ ¦ ¦производителя, предварительно уведомив лечащего врача ¦ ¦ ¦о порядке учета и интерпретации результатов ¦ ¦ ¦исследования ¦ +------------------+------------------------------------------------------+ ¦11. Контроль ¦На преаналитическом этапе оцениваются: ¦ ¦качества ¦- взятие биологического материала в соответствии с ¦ ¦ ¦требованиями; ¦ ¦ ¦- выполнение требований хранения и доставки материала ¦ ¦ ¦в лабораторию; ¦ ¦ ¦- выполнение требований маркировки проб и соответствия¦ ¦ ¦маркировки пробы маркировке направления; ¦ ¦ ¦- качество биологического материала (запрещается ¦ ¦ ¦тестирование гемолизированных, гиперлипидемичных ¦ ¦ ¦(хилезных), гипербилирубинемичных (желтушных) ¦ ¦ ¦образцов); ¦ ¦ ¦- контроль диагностикума (внешнее состояние, срок ¦ ¦ ¦годности), условия и сроки хранения; ¦ ¦ ¦- соответствие показателей внешней среды: температура ¦ ¦ ¦воздуха, влажность; ¦ ¦ ¦- качество лабораторной посуды. ¦ ¦ ¦На аналитическом этапе оцениваются: ¦ ¦ ¦- включение официально зарегистрированных контрольных ¦ ¦ ¦материалов с различным уровнем активности ¦ ¦ ¦(отрицательные, положительные, слабоположительные ¦ ¦ ¦сыворотки); ¦ ¦ ¦- соблюдение температурного режима и времени ¦ ¦ ¦инактивирования образца; ¦ ¦ ¦- исполнение методики постановки в соответствии с ¦ ¦ ¦инструкцией производителя; ¦ ¦ ¦- учет результатов с контрольным материалом и ¦ ¦ ¦испытуемым образцом в соответствии с официально ¦ ¦ ¦признанными критериями. ¦ ¦ ¦На постаналитическом этапе оцениваются: ¦ ¦ ¦- правильность внесения результатов в бланк ¦ ¦ ¦исследования; ¦ ¦ ¦- своевременное доведение информации до врача, ¦ ¦ ¦назначившего исследование ¦ +------------------+------------------------------------------------------+ ¦12. Нормативные ¦1. Безопасность работы с микроорганизмами III - IV ¦ ¦ссылки ¦групп патогенности с гельминтами. СП 17-129РБ 2000. ¦ ¦ ¦2. Применение ультрафиолетового бактерицидного ¦ ¦ ¦излучения для обеззараживания воздуха и поверхностей в¦ ¦ ¦лечебно-профилактических учреждениях от 01.06.2001 N ¦ ¦ ¦26-01-01. ¦ ¦ ¦3. Приказ МЗ РБ от 25 ноября 2002 г. N 165 "О ¦ ¦ ¦проведении дезинфекции и стерилизации учреждениями ¦ ¦ ¦здравоохранения". ¦ ¦ ¦4. Методические указания МУ N 90-9908 "Контроль ¦ ¦ ¦качества стерилизации изделий медицинского ¦ ¦ ¦назначения", Минск, 1999 г. ¦ ¦ ¦5. Санитарные правила и нормы 2.1.7.14-20-2005 ¦ ¦ ¦"Правила обращения с медицинскими отходами". ¦ ¦ ¦6. Инструкция 4.2.10-22-1-2006 "Методы ¦ ¦ ¦микробиологического контроля санитарно-гигиенического ¦ ¦ ¦состояния помещений в организациях здравоохранения и ¦ ¦ ¦стерильности изделий медицинского назначения". ¦ ¦ ¦7. Приказ МЗ РБ N 351 от 16.12.1998 "О пересмотре ¦ ¦ ¦ведомственных нормативных актов, регламентирующих ¦ ¦ ¦вопросы по проблеме ВИЧ/СПИД". ¦ ¦ ¦8. Инструкция N 113-0801 от 05.09.2001 "Гигиеническая ¦ ¦ ¦и хирургическая антисептика кожи рук медицинского ¦ ¦ ¦персонала". ¦ ¦ ¦9. Постановление Главного государственного ¦ ¦ ¦санитарного врача РБ N 71 от 11.07.2003 "Об ¦ ¦ ¦утверждении и введении санитарных правил устройства, ¦ ¦ ¦содержания и эксплуатации ЛПО" ¦ +------------------+------------------------------------------------------+ ¦13. Безопасность ¦В соответствии с требованиями нормативных документов ¦ ¦персонала ¦ ¦ ¦------------------+------------------------------------------------------- -------------------------------- <*> Описана типовая процедура. Если в инструкции производителя указаны иные требования к отбору, хранению и транспортировке проб, процедуре анализа и учету результатов, то необходимо следовать инструкции производителя. Приложение 7 МЕТОДИКА ВЫЯВЛЕНИЯ СУММАРНЫХ АНТИТЕЛ (ИЛИ АНТИТЕЛ ОДНОГО КЛАССА) К TREPONEMA PALLIDUM В СЫВОРОТКЕ КРОВИ, ПЛАЗМЕ, СПИННОМОЗГОВОЙ ЖИДКОСТИ МЕТОДОМ ИММУНОФЕРМЕНТНОГО АНАЛИЗА <*>-------------------+-------------------------------------------------- ¦1. Наименование ¦Выявление суммарных антител (или антител одного ¦ ¦метода ¦класса) к Treponema pallidum в сыворотке крови, ¦ ¦ ¦плазме, ликворе методом иммуноферментного анализа ¦ +------------------+------------------------------------------------------+ ¦2. Принцип метода ¦Образование комплекса антиген-антитело на твердофазном¦ ¦ ¦носителе в присутствии конъюгата, меченного ферментом,¦ ¦ ¦хромогена, изменение рН и окрашивания реагентной ¦ ¦ ¦смеси, интенсивность которого пропорциональна ¦ ¦ ¦концентрации антител ¦ +------------------+------------------------------------------------------+ ¦3. Биологический ¦Нативная сыворотка крови. ¦ ¦материал для ¦Плазма крови. ¦ ¦исследования ¦Спинномозговая жидкость ¦ +------------------+------------------------------------------------------+ ¦4. Условия ¦Пробирки с кровью, сывороткой, плазмой, ликвором ¦ ¦транспортировки ¦транспортируются в лабораторию в специальном закрытом ¦ ¦проб ¦контейнере при температуре +2 - 25 °C. ¦ ¦ ¦При невозможности немедленной доставки пробы хранятся ¦ ¦ ¦в холодильнике при температуре +2 - 8 °C не более 24 ¦ ¦ ¦часов. ¦ ¦ ¦В лаборатории первичные пробы исследуются в течение 24¦ ¦ ¦часов. При необходимости сохранения образца до 72 ¦ ¦ ¦часов отделяется сыворотка и хранится при температуре ¦ ¦ ¦+2 - 8 °C. ¦ ¦ ¦При необходимости хранения биологического материала в ¦ ¦ ¦течение более длительных сроков в лаборатории ¦ ¦ ¦производят замораживание проб в маркированных ¦ ¦ ¦пробирках типа Эппендорф, предварительно разделив ¦ ¦ ¦первичную пробу на несколько дублирующих по 0,5 - 1,0 ¦ ¦ ¦мл. Замораживание при температуре -18 - 20 °C ¦ ¦ ¦позволяет хранить образцы в течение 1 - 1,5 месяцев, ¦ ¦ ¦при температуре -70 °C срок хранения не лимитируется. ¦ ¦ ¦Первичные пробы с плазмой исследуются в течение 24 ¦ ¦ ¦часов с момента отбора, хранению не подлежат ¦ +------------------+------------------------------------------------------+ ¦5. Подготовка проб¦Образцы крови помещают в термостат при +37 °C на 15 - ¦ ¦к исследованию ¦30 минут или оставляют при комнатной температуре для ¦ ¦ ¦образования сгустка фибрина, затем помещают в ¦ ¦ ¦холодильник при +2 - 8 °C на 30 минут, после чего ¦ ¦ ¦пробирки с венозной кровью подвергают ¦ ¦ ¦центрифугированию в течение 10 минут при скорости ¦ ¦ ¦вращения ротора 1000 - 1500 оборотов в минуту. ¦ ¦ ¦Сыворотка переносится в другую пробирку для ¦ ¦ ¦последующего тестирования. Оттаивание сыворотки крови ¦ ¦ ¦для проведения исследования производят при комнатной ¦ ¦ ¦температуре или при температуре +2 - 8 °C бытового ¦ ¦ ¦холодильника. Для гомогенизации содержимого пробирки ¦ ¦ ¦после оттаивания его несколько раз тщательно ¦ ¦ ¦перемешивают перед выполнением исследования. ¦ ¦ ¦Пробирки со стабилизированной кровью (плазма) в ¦ ¦ ¦лаборатории центрифугируют 7 - 10 минут при скорости ¦ ¦ ¦вращения 1000 - 1500 оборотов в минуту. ¦ ¦ ¦Подготовка проб СМЖ не проводится ¦ +------------------+------------------------------------------------------+ ¦6. Оборудование, ¦1) Набор реактивов для проведения иммуноферментного ¦ ¦инструменты и ¦анализа. ¦ ¦материалы ¦2) Фотометр для измерения оптической плотности. ¦ ¦ ¦3) Полу- или автоматическое устройство для промывания ¦ ¦ ¦планшет. ¦ ¦ ¦4) Пипетки одноканальные автоматические. ¦ ¦ ¦5) Пипетки автоматические многоканальные. ¦ ¦ ¦6) Наконечники для автоматических пипеток разного ¦ ¦ ¦объема. ¦ ¦ ¦7) Термостат суховоздушный. ¦ ¦ ¦8) Мерные цилиндры. ¦ ¦ ¦9) Ванночки для реагентов или чашки Петри. ¦ ¦ ¦10) Крышка для планшета или клейкая лента. ¦ ¦ ¦11) Маркер. ¦ ¦ ¦12) Вата медицинская гигроскопическая. ¦ ¦ ¦13) Бумага фильтровальная. ¦ ¦ ¦14) Спирт этиловый 50%, 70%, 96%. ¦ ¦ ¦15) Перекись водорода. ¦ ¦ ¦16) Контейнеры для сбора твердых и жидких отходов. ¦ ¦ ¦17) Средства индивидуальной защиты персонала ¦ +------------------+------------------------------------------------------+ ¦7. Реагенты ¦Набор реактивов для проведения иммуноферментного ¦ ¦ ¦анализа: ¦ ¦ ¦- иммуносорбент: рекомбинантные антигены Treponema ¦ ¦ ¦pallidum (ультраозвученный, рекомбинантный, ¦ ¦ ¦полипептидный); ¦ ¦ ¦- инактивированный положительный контрольный образец; ¦ ¦ ¦- инактивированный отрицательный контрольный образец; ¦ ¦ ¦- конъюгат: смесь рекомбинантных белков Treponema ¦ ¦ ¦pallidum и моноклональных антител, конъюгированных с ¦ ¦ ¦пероксидазой хрена; ¦ ¦ ¦- субстрат; ¦ ¦ ¦- концентрат фосфатно-солевого буферного раствора; ¦ ¦ ¦- разводящий буферный раствор для сывороток; ¦ ¦ ¦- разводящий буферный раствор для конъюгата; ¦ ¦ ¦- буферный раствор для субстрата; ¦ ¦ ¦- стоп-реагент ¦ +------------------+------------------------------------------------------+ ¦8. Подготовка к ¦Перед использованием компоненты набора выдержать при ¦ ¦проведению анализа¦температуре +18 - 27 °С в течение 30 минут. ¦ ¦ ¦В случае выпадения кристаллов во флаконах с реагентами¦ ¦ ¦прогреть их при температуре +37 +/- 1 °C до полного ¦ ¦ ¦растворения кристаллов, после чего флаконы интенсивно ¦ ¦ ¦встряхнуть. ¦ ¦ ¦Освободить от упаковочного пакета необходимое для ¦ ¦ ¦анализа количество стрипов и закрепить их в рамках. ¦ ¦ ¦Неиспользованные стрипы хранить в плотно закрытом ¦ ¦ ¦пакете при температуре +2 - 8 °C в течение срока, ¦ ¦ ¦указанного производителем. ¦ ¦ ¦Разведение концентратов производить в соответствии с ¦ ¦ ¦требованиями инструкции по проведению анализа. ¦ ¦ ¦Перед внесением проб планшет промыть соответствующим ¦ ¦ ¦раствором с помощью автоматического устройства или 8- ¦ ¦ ¦канальной автоматической пипетки, если этого требует ¦ ¦ ¦инструкция производителя. ¦ ¦ ¦Произвести разметку планшета и внести соответствующую ¦ ¦ ¦нумерацию в протокол исследования ¦ +------------------+------------------------------------------------------+ ¦9. Процедура ¦В лунки планшета внести раствор для разведения ¦ ¦анализа ¦сыворотки в количестве, указанном производителем. ¦ ¦ ¦Внести контрольные и испытуемые образцы в соответствии¦ ¦ ¦с разметкой планшета. ¦ ¦ ¦Каждый образец после внесения пипетировать до ¦ ¦ ¦изменения цвета разводящего раствора, если это ¦ ¦ ¦предусмотрено инструкцией. Планшет закрыть крышкой ¦ ¦ ¦(заклеить лентой) и инкубировать при +37 °C в течение ¦ ¦ ¦периода времени, указанного в инструкции. ¦ ¦ ¦Удалить реагентную смесь и промыть планшет раствором ¦ ¦ ¦для промывания в соответствии с инструкцией ¦ ¦ ¦производителя, остатки влаги удалить. ¦ ¦ ¦Во все лунки внести конъюгат в рабочем разведении. ¦ ¦ ¦Планшет закрыть крышкой (заклеить лентой) и ¦ ¦ ¦инкубировать при +37 °C в течение периода времени, ¦ ¦ ¦указанного производителем. ¦ ¦ ¦Удалить реагентную смесь и промыть планшет раствором ¦ ¦ ¦для промывания, остатки влаги удалить. ¦ ¦ ¦В каждую лунку внести субстрат. Инкубировать при ¦ ¦ ¦комнатной температуре (+20 - 25 °C) в защищенном от ¦ ¦ ¦света месте в течение периода времени, указанного ¦ ¦ ¦производителем. ¦ ¦ ¦Остановить реакцию путем внесения в каждую лунку стоп-¦ ¦ ¦раствора ¦ +------------------+------------------------------------------------------+ ¦10. Учет и оценка ¦Производятся после остановки реакции на ¦ ¦результата ¦спектрофотометре со светофильтром с длиной волны, ¦ ¦ ¦указанной производителем. Выведение спектрофотометра ¦ ¦ ¦на нулевой уровень осуществляется по воздуху. ¦ ¦ ¦Критерии приемлемости результатов: ¦ ¦ ¦- значения оптической плотности (ОП) в лунках, с ¦ ¦ ¦контролем конъюгата и отрицательным контролем не ¦ ¦ ¦превышает указанного в паспорте; ¦ ¦ ¦- значения ОП в лунках, с положительным контролем не ¦ ¦ ¦ниже указанного в паспорте. ¦ ¦ ¦Для учета результатов применяется формула: ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ОПкрит = ОПср.(К-) + k, ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ где ОПкрит - граничное значение ОП; ¦ ¦ ¦ ОПср.(К-) - среднее арифметическое значение ОП ¦ ¦ ¦отрицательных контрольных проб; ¦ ¦ ¦ k - коэффициент, указанный производителем. ¦ ¦ ¦Проба считается положительной, если ее ОП превышает ¦ ¦ ¦расчетное значение ОПкрит. ¦ ¦ ¦Проба считается отрицательной, если ее значение ниже ¦ ¦ ¦ОПкрит. ¦ ¦ ¦Значение ОП, которое находится в промежутке ОПкрит. ¦ ¦ ¦+/-10%, считается неопределенным (серая зона). ¦ ¦ ¦Проба с положительным и неопределенным результатами ¦ ¦ ¦повторно тестируется не менее чем в 2 лунках, ¦ ¦ ¦предпочтительнее - на тест-системе другого ¦ ¦ ¦производителя. ¦ ¦ ¦Образцы заключения: ¦ ¦ ¦1) результат ИФА положительный; ¦ ¦ ¦2) результат ИФА отрицательный; ¦ ¦ ¦3) результат ИФА неопределенный ¦ +------------------+------------------------------------------------------+ ¦11. Контроль ¦На преаналитическом этапе оцениваются: ¦ ¦качества ¦- взятие биологического материала в соответствии с ¦ ¦ ¦требованиями; ¦ ¦ ¦- выполнение требований хранения и доставки материала ¦ ¦ ¦в лабораторию; ¦ ¦ ¦- выполнение требований маркировки проб и соответствия¦ ¦ ¦маркировки пробы маркировке направления; ¦ ¦ ¦- качество биологического материала (запрещается ¦ ¦ ¦тестирование гемолизированных, гиперлипидемичных ¦ ¦ ¦(хилезных), гипербилирубинемичных (желтушных) ¦ ¦ ¦образцов); ¦ ¦ ¦- контроль диагностикума (внешнее состояние, срок ¦ ¦ ¦годности), условия и сроки хранения; ¦ ¦ ¦- соответствие показателей внешней среды - температура¦ ¦ ¦воздуха, влажность; ¦ ¦ ¦- качество дистиллированной воды на соответствие ¦ ¦ ¦требованиям производителя набора; ¦ ¦ ¦- качество лабораторной посуды; ¦ ¦ ¦- правильность установки лабораторной мебели ¦ ¦ ¦(отсутствие в непосредственной близости источников ¦ ¦ ¦вибрации, угол наклона лабораторного стола не более ¦ ¦ ¦5°). ¦ ¦ ¦На аналитическом этапе оцениваются: ¦ ¦ ¦- включение официально зарегистрированных контрольных ¦ ¦ ¦материалов с различным уровнем активности ¦ ¦ ¦(отрицательные, положительные); ¦ ¦ ¦- исполнение методики постановки в соответствии с ¦ ¦ ¦инструкцией производителя; ¦ ¦ ¦- внесение пробы и реагентов в центр лунки, не касаясь¦ ¦ ¦дна и краев; ¦ ¦ ¦- качество промывки планшетов: необходимо заполнять ¦ ¦ ¦лунки в объеме не менее чем 300 мкл раствора, избегать¦ ¦ ¦переполнения и перетекания жидкости в соседние лунки, ¦ ¦ ¦тщательно осушить лунки после каждого этапа промывки. ¦ ¦ ¦На постаналитическом этапе оцениваются: ¦ ¦ ¦- правильность внесения результатов в бланк ¦ ¦ ¦исследования; ¦ ¦ ¦- своевременное доведение информации до врача, ¦ ¦ ¦назначившего исследование ¦ +------------------+------------------------------------------------------+ ¦12. Нормативные ¦1. Безопасность работы с микроорганизмами III - IV ¦ ¦ссылки ¦групп патогенности с гельминтами. СП 17-129РБ 2000. ¦ ¦ ¦2. Применение ультрафиолетового бактерицидного ¦ ¦ ¦излучения для обеззараживания воздуха и поверхностей в¦ ¦ ¦лечебно-профилактических учреждениях от 01.06.2001 N ¦ ¦ ¦26-01-01. ¦ ¦ ¦3. Приказ МЗ РБ от 25 ноября 2002 г. N 165 "О ¦ ¦ ¦проведении дезинфекции и стерилизации учреждениями ¦ ¦ ¦здравоохранения". ¦ ¦ ¦4. Методические указания МУ N 90-9908 "Контроль ¦ ¦ ¦качества стерилизации изделий медицинского ¦ ¦ ¦назначения", Минск, 1999 г. ¦ ¦ ¦5. Санитарные правила и нормы 2.1.7.14-20-2005 ¦ ¦ ¦"Правила обращения с медицинскими отходами". ¦ ¦ ¦6. Инструкция 4.2.10-22-1-2006 "Методы ¦ ¦ ¦микробиологического контроля санитарно-гигиенического ¦ ¦ ¦состояния помещений в организациях здравоохранения и ¦ ¦ ¦стерильности изделий медицинского назначения". ¦ ¦ ¦7. Приказ МЗ РБ N 351 от 16.12.1998 "О пересмотре ¦ ¦ ¦ведомственных нормативных актов, регламентирующих ¦ ¦ ¦вопросы по проблеме ВИЧ/СПИД". ¦ ¦ ¦8. Инструкция N 113-0801 от 05.09.2001 "Гигиеническая ¦ ¦ ¦и хирургическая антисептика кожи рук медицинского ¦ ¦ ¦персонала". ¦ ¦ ¦9. Постановление Главного государственного ¦ ¦ ¦санитарного врача РБ N 71 от 11.07.2003 "Об ¦ ¦ ¦утверждении и введении санитарных правил устройства, ¦ ¦ ¦содержания и эксплуатации ЛПО" ¦ +------------------+------------------------------------------------------+ ¦13. Безопасность ¦В соответствии с требованиями нормативных документов ¦ ¦персонала ¦ ¦ ¦------------------+------------------------------------------------------- -------------------------------- <*> Описана типовая процедура. Если в инструкции производителя указаны иные требования к отбору, хранению и транспортировке проб, процедуре анализа и учету результатов, то необходимо следовать инструкции производителя. Приложение 8 МЕТОДИКА ВЫЯВЛЕНИЯ СУММАРНЫХ АНТИТЕЛ (ИЛИ АНТИТЕЛ ОДНОГО КЛАССА) К TREPONEMA PALLIDUM МЕТОДОМ РЕАКЦИИ ПАССИВНОЙ ГЕМАГГЛЮТИНАЦИИ <*>-------------------+-------------------------------------------------- ¦1. Наименование ¦Реакция пассивной гемагглютинации (РПГА, ТРРА, ТРНА) ¦ ¦метода ¦ ¦ +------------------+------------------------------------------------------+ ¦2. Принцип метода ¦Взаимодействие антител и антигенов Treponema pallidum,¦ ¦ ¦конъюгированных с эритроцитами животных, завершается ¦ ¦ ¦образованием агглютинатов ¦ +------------------+------------------------------------------------------+ ¦3. Биологический ¦Нативная сыворотка крови. ¦ ¦материал для ¦Спинномозговая жидкость (СМЖ) ¦ ¦исследования ¦ ¦ +------------------+------------------------------------------------------+ ¦4. Условия ¦Пробирки с кровью, СМЖ транспортируются в лабораторию ¦ ¦транспортировки ¦в специальном закрытом контейнере при температуре ¦ ¦проб ¦+2 - 25 °C. ¦ ¦ ¦При невозможности немедленной доставки пробы хранятся ¦ ¦ ¦в холодильнике при температуре +2 - 8 °C не более 24 ¦ ¦ ¦часов. ¦ ¦ ¦В лаборатории первичные пробы исследуются в течение 24¦ ¦ ¦часов. При необходимости сохранения образца до 72 ¦ ¦ ¦часов отделяется сыворотка и хранится при температуре ¦ ¦ ¦+2 - 8 °C. ¦ ¦ ¦При необходимости хранения биологического материала в ¦ ¦ ¦течение более длительных сроков в лаборатории ¦ ¦ ¦производят замораживание проб в маркированных ¦ ¦ ¦пробирках типа Эппендорф, предварительно разделив ¦ ¦ ¦первичную пробу на несколько дублирующих по 0,5 - 1,0 ¦ ¦ ¦мл. Замораживание при температуре -18 - 20 °C ¦ ¦ ¦позволяет хранить образцы в течение 1 - 1,5 месяцев, ¦ ¦ ¦при температуре -70 °C срок хранения не лимитируется ¦ +------------------+------------------------------------------------------+ ¦5. Подготовка проб¦Образцы крови помещают в термостат при +37 °C на 15 - ¦ ¦к исследованию ¦30 минут или оставляют при комнатной температуре для ¦ ¦ ¦образования сгустка фибрина, затем помещают в ¦ ¦ ¦холодильник при +2 - 8 °C на 30 минут, после чего ¦ ¦ ¦пробирки с венозной кровью подвергают ¦ ¦ ¦центрифугированию в течение 10 минут при скорости ¦ ¦ ¦вращения ротора 1000 - 1500 оборотов в минуту. ¦ ¦ ¦Сыворотка переносится в другую пробирку для ¦ ¦ ¦последующего тестирования. Оттаивание сыворотки крови ¦ ¦ ¦для проведения исследования производят при комнатной ¦ ¦ ¦температуре или при температуре +2 - 8 °C бытового ¦ ¦ ¦холодильника. Для гомогенизации содержимого пробирки ¦ ¦ ¦после оттаивания его несколько раз тщательно ¦ ¦ ¦перемешивают перед выполнением исследования. ¦ ¦ ¦Подготовка проб СМЖ не проводится ¦ +------------------+------------------------------------------------------+ ¦6. Оборудование, ¦1) Набор для РПГА. ¦ ¦инструменты и ¦2) Дозаторы пипеточные переменного объема, ¦ ¦материалы ¦позволяющие отбирать 100 мкл, 90 мкл, 80 мкл, 20 мкл, ¦ ¦ ¦10 мкл жидкости. ¦ ¦ ¦3) Наконечники для дозатора универсальные. ¦ ¦ ¦4) Пробирки (стеклянные или одноразовые). ¦ ¦ ¦5) Планшеты иммунологические с U-образным дном. ¦ ¦ ¦6) Центрифуга с горизонтальным ротором, развивающая ¦ ¦ ¦ускорение 1000 - 3000 оборотов в минуту. ¦ ¦ ¦7) Перекись водорода. ¦ ¦ ¦8) Контейнеры для сбора твердых и жидких отходов. ¦ ¦ ¦9) Маркер. ¦ ¦ ¦10) Средства индивидуальной защиты персонала. ¦ ¦ ¦11) Дезинфицирующие растворы, разрешенные к применению¦ ¦ ¦Министерством здравоохранения Республики Беларусь. ¦ ¦ ¦12) Оборудование для автоматизированного учета ¦ ¦ ¦результатов ¦ +------------------+------------------------------------------------------+ ¦7. Реагенты ¦Набор для РПГА: ¦ ¦ ¦- тест-эритроциты - эритроциты животных, ¦ ¦ ¦сенсибилизированные антигеном Treponema pallidum ¦ ¦ ¦(вместо эритроцитов животных производителем могут ¦ ¦ ¦использоваться частицы латекса); ¦ ¦ ¦- контрольные эритроциты; ¦ ¦ ¦- буферный раствор для разведения проб; ¦ ¦ ¦- раствор для разведения эритроцитов; ¦ ¦ ¦- положительный и отрицательный контроли; ¦ ¦ ¦- мерные дозирующие пипетки для тест-эритроцитов и ¦ ¦ ¦контрольных эритроцитов; ¦ ¦ ¦- иммунологические планшеты с 96 лунками для ¦ ¦ ¦постановки реакции (в состав набора могут не ¦ ¦ ¦включаться) ¦ +------------------+------------------------------------------------------+ ¦8. Подготовка к ¦Перед использованием компоненты набора выдержать при ¦ ¦проведению анализа¦температуре +18 - 27 °C в течение 30 минут. ¦ ¦ ¦Произвести маркировку планшета: ¦ ¦ ¦- ряды 1, 2, 7, 8 - предварительное разведение проб; ¦ ¦ ¦- ряды 3, 9 - проведение реакции с контрольными ¦ ¦ ¦эритроцитами; ¦ ¦ ¦- ряды 4, 10 - проведение реакции с тест-эритроцитами;¦ ¦ ¦- ряд 12 - контрольные пробы. ¦ ¦ ¦Вскрыть флаконы с контрольными и тест-эритроцитами и ¦ ¦ ¦развести их указанным в инструкции количеством ¦ ¦ ¦раствора для разведения. ¦ ¦ ¦Тщательно перемешать плавными покачивающими движениями¦ ¦ ¦для обеспечения равномерной взвеси ¦ +------------------+------------------------------------------------------+ ¦9. Процедура ¦Качественный вариант: ¦ ¦анализа ¦- внести в лунки планшета требуемое в инструкции ¦ ¦ ¦количество буферного раствора для разведения проб; ¦ ¦ ¦- произвести разведение контрольных и исследуемых проб¦ ¦ ¦в соответствии с инструкцией; ¦ ¦ ¦- внести контрольные и тест-эритроциты в ¦ ¦ ¦соответствующие ряды; ¦ ¦ ¦- перемешать реагентную смесь путем аккуратного ¦ ¦ ¦постукивания в течение 30 секунд или на шейкере; ¦ ¦ ¦- планшет накрыть крышкой, оставить при комнатной ¦ ¦ ¦температуре в неподвижном состоянии, учет результатов ¦ ¦ ¦произвести через 60 минут. ¦ ¦ ¦В количественном варианте исследуются все пробы, ¦ ¦ ¦показавшие при скрининге положительные или ¦ ¦ ¦слабоположительные результаты. ¦ ¦ ¦Количественный вариант: ¦ ¦ ¦- в лунки планшета со 2-й по 10-ю внести требуемое ¦ ¦ ¦инструкцией производителя количество раствора для ¦ ¦ ¦разведения сыворотки; ¦ ¦ ¦- в 1-ю и 2-ю лунки планшета внести исследуемую пробу ¦ ¦ ¦в количестве, предусмотренном инструкцией; ¦ ¦ ¦- многократным пипетированием во 2-й лунке перемешать ¦ ¦ ¦содержимое, стараясь избежать образования пены; ¦ ¦ ¦- перенести требуемое количество полученного ¦ ¦ ¦разведения последовательно во все лунки; ¦ ¦ ¦- во все лунки планшета добавить тест-эритроциты в ¦ ¦ ¦количестве, предусмотренном инструкцией производителя;¦ ¦ ¦- перемешать реагентную смесь путем аккуратного ¦ ¦ ¦постукивания в течение 30 секунд или на шейкере; ¦ ¦ ¦- планшет накрыть крышкой, оставить при комнатной ¦ ¦ ¦температуре в неподвижном состоянии, учет результатов ¦ ¦ ¦производят через 60 минут ¦ +------------------+------------------------------------------------------+ ¦10. Учет и оценка ¦При автоматизированном учете результатов реакции ¦ ¦результата ¦необходимо следовать инструкции производителя прибора ¦ ¦ ¦автоматизированного учета. ¦ ¦ ¦При визуальном учете: учесть результаты положительного¦ ¦ ¦и отрицательного контролей. При несоответствии ¦ ¦ ¦результатов критериям, заявленным производителем ¦ ¦ ¦набора, тестирование проводится повторно. ¦ ¦ ¦Критерием оценки результатов РПГА являются форма и ¦ ¦ ¦характер осадка эритроцитов на дне лунок ¦ ¦ ¦иммунологического планшета: ¦ ¦ ¦- эритроциты располагаются ровным слоем по всему дну ¦ ¦ ¦лунки, высокое содержание специфических антител в ¦ ¦ ¦пробе - результат "резко положительный"; ¦ ¦ ¦- эритроциты располагаются на большей части дна лунки,¦ ¦ ¦при этом по периферии осадка формируется заметное ¦ ¦ ¦кольцо из осадка эритроцитов - результат ¦ ¦ ¦"положительный"; ¦ ¦ ¦- эритроциты располагаются на небольшой части дна ¦ ¦ ¦лунки, в центральной части формируется плотное кольцо ¦ ¦ ¦из осадка эритроцитов с заметным просветлением в ¦ ¦ ¦центральной части - результат "слабоположительный"; ¦ ¦ ¦- компактный осадок в центральной части дна лунки на ¦ ¦ ¦чистом окружающем фоне - результат "отрицательный". ¦ ¦ ¦Если производителем предусмотрена оценка позитивности ¦ ¦ ¦по системе плюсов "+", необходимо следовать инструкции¦ ¦ ¦производителя, предварительно уведомив лечащего врача ¦ ¦ ¦о порядке учета и интерпретации результатов ¦ ¦ ¦исследования ¦ +------------------+------------------------------------------------------+ ¦11. Контроль ¦На преаналитическом этапе оцениваются: ¦ ¦качества ¦- взятие биологического материала в соответствии с ¦ ¦ ¦требованиями; ¦ ¦ ¦- выполнение требований хранения и доставки материала ¦ ¦ ¦в лабораторию; ¦ ¦ ¦- выполнение требований маркировки проб и соответствия¦ ¦ ¦маркировки пробы маркировке направления; ¦ ¦ ¦- качество биологического материала (запрещается ¦ ¦ ¦тестирование гемолизированных, гиперлипидемичных ¦ ¦ ¦(хилезных), гипербилирубинемичных (желтушных) ¦ ¦ ¦образцов); ¦ ¦ ¦- контроль диагностикума (внешнее состояние, срок ¦ ¦ ¦годности), условия и сроки хранения; ¦ ¦ ¦- соответствие показателей внешней среды - температура¦ ¦ ¦воздуха, влажность; ¦ ¦ ¦- качество лабораторной посуды; ¦ ¦ ¦- правильность установки лабораторной мебели ¦ ¦ ¦(отсутствие в непосредственной близости источников ¦ ¦ ¦вибрации, угол наклона лабораторного стола не более ¦ ¦ ¦5°). ¦ ¦ ¦На аналитическом этапе оцениваются: ¦ ¦ ¦- включение официально зарегистрированных контрольных ¦ ¦ ¦материалов с различным уровнем активности ¦ ¦ ¦(отрицательные, положительные); ¦ ¦ ¦- выполнение методики постановки в соответствии с ¦ ¦ ¦инструкцией производителя. ¦ ¦ ¦На постаналитическом этапе оцениваются: ¦ ¦ ¦- правильность внесения результатов в бланк ¦ ¦ ¦исследования; ¦ ¦ ¦- своевременное доведение информации до врача, ¦ ¦ ¦назначившего исследование ¦ +------------------+------------------------------------------------------+ ¦12. Нормативные ¦1. Безопасность работы с микроорганизмами III - IV ¦ ¦ссылки ¦групп патогенности с гельминтами. СП 17-129РБ 2000. ¦ ¦ ¦2. Применение ультрафиолетового бактерицидного ¦ ¦ ¦излучения для обеззараживания воздуха и поверхностей в¦ ¦ ¦лечебно-профилактических учреждениях от 01.06.2001 N ¦ ¦ ¦26-01-01. ¦ ¦ ¦3. Приказ МЗ РБ от 25 ноября 2002 г. N 165 "О ¦ ¦ ¦проведении дезинфекции и стерилизации учреждениями ¦ ¦ ¦здравоохранения". ¦ ¦ ¦4. Методические указания МУ N 90-9908 "Контроль ¦ ¦ ¦качества стерилизации изделий медицинского ¦ ¦ ¦назначения", Минск, 1999 г. ¦ ¦ ¦5. Санитарные правила и нормы 2.1.7.14-20-2005 ¦ ¦ ¦"Правила обращения с медицинскими отходами". ¦ ¦ ¦6. Инструкция 4.2.10-22-1-2006 "Методы ¦ ¦ ¦микробиологического контроля санитарно-гигиенического ¦ ¦ ¦состояния помещений в организациях здравоохранения и ¦ ¦ ¦стерильности изделий медицинского назначения". ¦ ¦ ¦7. Приказ МЗ РБ N 351 от 16.12.1998 "О пересмотре ¦ ¦ ¦ведомственных нормативных актов, регламентирующих ¦ ¦ ¦вопросы по проблеме ВИЧ/СПИД". ¦ ¦ ¦8. Инструкция N 113-0801 от 05.09.2001 "Гигиеническая ¦ ¦ ¦и хирургическая антисептика кожи рук медицинского ¦ ¦ ¦персонала". ¦ ¦ ¦9. Постановление Главного государственного ¦ ¦ ¦санитарного врача РБ N 71 от 11.07.2003 "Об ¦ ¦ ¦утверждении и введении санитарных правил устройства, ¦ ¦ ¦содержания и эксплуатации ЛПО" ¦ +------------------+------------------------------------------------------+ ¦13. Безопасность ¦В соответствии с требованиями нормативных документов ¦ ¦персонала ¦ ¦ ¦------------------+------------------------------------------------------- -------------------------------- <*> Описана типовая процедура. Если в инструкции производителя указаны иные требования к отбору, хранению и транспортировке проб, процедуре анализа и учету результатов, то необходимо следовать инструкции производителя. Приложение 9 МЕТОДИКА ВЫЯВЛЕНИЯ СУММАРНЫХ АНТИТЕЛ К TREPONEMA PALLIDUM В СЫВОРОТКЕ КРОВИ, СПИННОМОЗГОВОЙ ЖИДКОСТИ МЕТОДОМ НЕПРЯМОЙ ИММУНОФЛЮОРЕСЦЕНЦИИ <*>-------------------+-------------------------------------------------- ¦1. Наименование ¦Выявление суммарных антител к Treponema pallidum в ¦ ¦метода ¦сыворотке крови, спинномозговой жидкости методом ¦ ¦ ¦непрямой иммунофлюоресценции (РИФабс, РИФ-200, РИФц) ¦ +------------------+------------------------------------------------------+ ¦2. Принцип метода ¦Выявление комплекса антиген-антитело с помощью ¦ ¦ ¦иммуноглобулинов диагностических флюоресцирующих ¦ ¦ ¦антивидовых против иммуноглобулинов человека ¦ +------------------+------------------------------------------------------+ ¦3. Биологический ¦Нативная сыворотка крови. ¦ ¦материал для ¦Спинномозговая жидкость ¦ ¦исследования ¦ ¦ +------------------+------------------------------------------------------+ ¦4. Условия ¦Пробирки с кровью, сывороткой, СМЖ транспортируются в ¦ ¦транспортировки ¦лабораторию в специальном закрытом контейнере при ¦ ¦проб ¦температуре +2 - 25 °C. ¦ ¦ ¦При невозможности немедленной доставки пробы хранятся ¦ ¦ ¦в холодильнике при температуре +2 - 8 °C не более 24 ¦ ¦ ¦часов. ¦ ¦ ¦В лаборатории первичные пробы исследуются в течение 24¦ ¦ ¦часов. При необходимости сохранения образца до 72 ¦ ¦ ¦часов отделяется сыворотка и хранится при температуре ¦ ¦ ¦+2 - 8 °C. ¦ ¦ ¦При необходимости хранения биологического материала в ¦ ¦ ¦течение более длительных сроков в лаборатории ¦ ¦ ¦производят замораживание проб в маркированных ¦ ¦ ¦пробирках типа Эппендорф, предварительно разделив ¦ ¦ ¦первичную пробу на несколько дублирующих по 0,5 - 1,0 ¦ ¦ ¦мл. Замораживание при температуре -18 - 20 °C ¦ ¦ ¦позволяет хранить образцы в течение 1 - 1,5 месяцев, ¦ ¦ ¦при температуре -70 °C срок хранения не лимитируется ¦ +------------------+------------------------------------------------------+ ¦5. Подготовка проб¦Образцы крови помещают в термостат при +37 °C на 15 - ¦ ¦к исследованию ¦30 минут или оставляют при комнатной температуре для ¦ ¦ ¦образования сгустка фибрина, затем помещают в ¦ ¦ ¦холодильник при +2 - 8 °C на 30 минут, после чего ¦ ¦ ¦пробирки с венозной кровью подвергают ¦ ¦ ¦центрифугированию в течение 10 минут при скорости ¦ ¦ ¦вращения ротора 1000 - 1500 оборотов в минуту. ¦ ¦ ¦Сыворотка переносится в другую пробирку для ¦ ¦ ¦последующего тестирования. Оттаивание сыворотки крови ¦ ¦ ¦для проведения исследования производят при комнатной ¦ ¦ ¦температуре или при температуре +2 - 8 °C бытового ¦ ¦ ¦холодильника. Для гомогенизации содержимого пробирки ¦ ¦ ¦после оттаивания его несколько раз тщательно ¦ ¦ ¦перемешивают перед выполнением исследования. ¦ ¦ ¦Подготовка проб СМЖ не проводится ¦ +------------------+------------------------------------------------------+ ¦6. Оборудование, ¦1) Набор для реакции непрямой иммунофлюоресценции. ¦ ¦инструменты и ¦2) Микроскоп люминесцентный с ртутно-кварцевой ¦ ¦материалы ¦лампой, иммерсионной системой, окуляром 4X или 5X, ¦ ¦ ¦фильтрами СЗС-7 или СЗС-14; ФС-1; БС-8. ¦ ¦ ¦3) Пипетки одноканальные автоматические. ¦ ¦ ¦4) Пипетки автоматические многоканальные. ¦ ¦ ¦5) Наконечники для автоматических пипеток разного ¦ ¦ ¦объема. ¦ ¦ ¦6) Термостат суховоздушный. ¦ ¦ ¦7) Центрифуга. ¦ ¦ ¦8) Влажная камера. ¦ ¦ ¦9) Мерные цилиндры. ¦ ¦ ¦10) Емкости для промывки стекол. ¦ ¦ ¦11) Нефлуоресцирующее иммерсионное масло ¦ ¦ ¦(диметилфталат). ¦ ¦ ¦12) Маркер. ¦ ¦ ¦13) Вата медицинская гигроскопическая. ¦ ¦ ¦14) Бумага фильтровальная. ¦ ¦ ¦15) Спирт этиловый. ¦ ¦ ¦16) Перекись водорода. ¦ ¦ ¦17) Контейнеры для сбора твердых и жидких отходов. ¦ ¦ ¦18) Средства индивидуальной защиты персонала ¦ +------------------+------------------------------------------------------+ ¦7. Реагенты ¦Набор для реакции непрямой иммунофлюоресценции: ¦ ¦ ¦- стекло предметное с фиксированным инактивированным ¦ ¦ ¦антигеном Treponema pallidum; ¦ ¦ ¦- положительный контрольный образец; ¦ ¦ ¦- слабоположительный контрольный образец; ¦ ¦ ¦- отрицательный контрольный образец; ¦ ¦ ¦- конъюгат: антитела к иммуноглобулинам человека, ¦ ¦ ¦меченные флюорохромом; ¦ ¦ ¦- сорбент: лиофилизированный экстракт из культуры ¦ ¦ ¦Treponema pallidum, дезинтегрированных ультразвуком; ¦ ¦ ¦- концентрат фосфатного буферного раствора; ¦ ¦ ¦- физиологический раствор ¦ +------------------+------------------------------------------------------+ ¦8. Подготовка к ¦Необходимое количество предметных стекол с антигеном ¦ ¦проведению анализа¦выдержать при температуре +18 - 27 °C в течение 30 ¦ ¦ ¦минут; стекла с антигеном без упаковки хранению не ¦ ¦ ¦подлежат. ¦ ¦ ¦Концентрат фосфатного буферного раствора тщательно ¦ ¦ ¦взболтать, в случае выпадения кристаллов прогреть при ¦ ¦ ¦температуре +37 +/- 1 °C до полного растворения ¦ ¦ ¦кристаллов, после чего флаконы интенсивно встряхнуть. ¦ ¦ ¦Содержимое флакона развести дистиллированной водой в ¦ ¦ ¦соответствии с инструкцией производителя. ¦ ¦ ¦Приготовить предварительное и рабочее разведение ¦ ¦ ¦сорбента в соответствии с инструкцией. ¦ ¦ ¦Приготовить предварительное и рабочее разведение ¦ ¦ ¦конъюгата в соответствии с инструкцией. Рабочее ¦ ¦ ¦разведение конъюгата разведению не подлежит. ¦ ¦ ¦Контрольные образцы и инактивированные исследуемые ¦ ¦ ¦пробы развести: ¦ ¦ ¦- для РИФ-200 - буферным раствором в 200 раз; ¦ ¦ ¦- для РИФабс - сорбентом в рабочем разведении в 5 раз;¦ ¦ ¦- для РИФц использовать неразведенную СМЖ ¦ +------------------+------------------------------------------------------+ ¦9. Процедура ¦Нанести исследуемые пробы на антиген, фиксированный на¦ ¦анализа ¦стекле, равномерно покрывая препарат. Избегать касания¦ ¦ ¦наконечником поверхности стекла. ¦ ¦ ¦Поместить препарат во влажную камеру, инкубировать при¦ ¦ ¦температуре +37 +/- 1 °C в течение 30 минут. ¦ ¦ ¦Препараты промыть в соответствии с инструкцией ¦ ¦ ¦производителя. ¦ ¦ ¦Высушить в термостате при температуре +37 +/- 1 °C в ¦ ¦ ¦течение 20 - 25 минут до полного высыхания. ¦ ¦ ¦На препарат нанести раствор конъюгата в рабочем ¦ ¦ ¦разведении, поместить во влажную камеру при ¦ ¦ ¦температуре +37 +/- 1 °C в течение 30 минут. ¦ ¦ ¦Препарат отмыть в новой порции отмывающего раствора в ¦ ¦ ¦соответствии с инструкцией производителя. Высушить в ¦ ¦ ¦термостате при температуре +37 +/- 1 °C в течение ¦ ¦ ¦20 - 25 минут до полного высыхания. ¦ ¦ ¦Готовые препараты необходимо предохранять от ¦ ¦ ¦воздействия света. ¦ ¦ ¦Исследование препарата проводить сразу после окончания¦ ¦ ¦реакции, нанеся на поверхности одну каплю ¦ ¦ ¦нефлюоресцирующего иммерсионного масла. ¦ ¦ ¦Если инструкция предусматривает отклонение от ¦ ¦ ¦описанной процедуры анализа, необходимо следовать ¦ ¦ ¦инструкции производителя. ¦ ¦ ¦Количественный вариант: ¦ ¦ ¦В количественном варианте исследуются все пробы, ¦ ¦ ¦показавшие положительные результаты. ¦ ¦ ¦В чистых сухих пробирках приготовить последовательные ¦ ¦ ¦разведения пробы от 1:5 до 1:2560 (при необходимости и¦ ¦ ¦более): в 10 пробирок внести по 80 мкл сорбента в ¦ ¦ ¦рабочем разведении; в 1-ю пробирку добавить 20 мкл ¦ ¦ ¦сыворотки крови, из первой пробирки после тщательного ¦ ¦ ¦перемешивания перенести 20 мкл во вторую; повторить ¦ ¦ ¦процедуру последовательно до 10-й пробирки; 20 мкл из ¦ ¦ ¦10-й пробирки удалить в дезинфицирующий раствор. ¦ ¦ ¦Процедуру анализа повторить в отношении каждого ¦ ¦ ¦разведения в соответствии с описанной выше. ¦ ¦ ¦При постановке количественного варианта по РИФ-200 ¦ ¦ ¦сыворотка крови разводится буферным раствором от 1:200¦ ¦ ¦до 1:51200 (при необходимости и более) ¦ +------------------+------------------------------------------------------+ ¦10. Учет и оценка ¦Учет результатов реакции осуществлять путем оценки ¦ ¦результата ¦интенсивности свечения Treponema pallidum под ¦ ¦ ¦воздействием ультрафиолетового света в люминесцентном ¦ ¦ ¦микроскопе. ¦ ¦ ¦Критерии приемлемости результатов: ¦ ¦ ¦- положительный контрольный образец дает свечение 4+; ¦ ¦ ¦- слабоположительный контрольный образец дает свечение¦ ¦ ¦2+; ¦ ¦ ¦- отрицательный контрольный образец не дает свечения. ¦ ¦ ¦Проба считается положительной, если препарат дает ¦ ¦ ¦блестящее зелено-желтое свечение (4+), яркое зелено- ¦ ¦ ¦желтое свечение (3+). ¦ ¦ ¦Проба считается слабоположительной, если свечение ¦ ¦ ¦бледно-зеленого цвета. ¦ ¦ ¦Отрицательными считаются образцы, если трепонемы ¦ ¦ ¦окрашены незначительно интенсивнее фона или не дают ¦ ¦ ¦свечения вообще ¦ +------------------+------------------------------------------------------+ ¦11. Контроль ¦На преаналитическом этапе оцениваются: ¦ ¦качества ¦- взятие биологического материала в соответствии с ¦ ¦ ¦требованиями; ¦ ¦ ¦- выполнение требований хранения и доставки материала ¦ ¦ ¦в лабораторию; ¦ ¦ ¦- выполнение требований маркировки проб и соответствия¦ ¦ ¦маркировки пробы маркировке направления; ¦ ¦ ¦- качество биологического материала (запрещается ¦ ¦ ¦тестирование гемолизированных, гиперлипидемичных ¦ ¦ ¦(хилезных), гипербилирубинемичных (желтушных) ¦ ¦ ¦образцов); ¦ ¦ ¦- контроль диагностикума (внешнее состояние, срок ¦ ¦ ¦годности), условия и сроки хранения; ¦ ¦ ¦- соответствие показателей внешней среды - температура¦ ¦ ¦воздуха, влажность; ¦ ¦ ¦- качество лабораторной посуды; ¦ ¦ ¦- правильность установки лабораторной мебели ¦ ¦ ¦(отсутствие в непосредственной близости источников ¦ ¦ ¦вибрации, угол наклона лабораторного стола не более ¦ ¦ ¦5°). ¦ ¦ ¦На аналитическом этапе оцениваются: ¦ ¦ ¦- включение официально зарегистрированных контрольных ¦ ¦ ¦материалов с различным уровнем активности ¦ ¦ ¦(отрицательные, положительные, слабоположительные); ¦ ¦ ¦- исполнение методики постановки в соответствии с ¦ ¦ ¦инструкцией производителя; ¦ ¦ ¦- качество промывки стекол соответствует инструкции ¦ ¦ ¦производителя; ¦ ¦ ¦- использование для учета реакции нефлюоресцирующего ¦ ¦ ¦иммерсионного масла и предусмотренных производителем ¦ ¦ ¦светофильтров; ¦ ¦ ¦- учет результатов с контрольным материалом и ¦ ¦ ¦испытуемым образцом в соответствии с официально ¦ ¦ ¦признанными критериями. ¦ ¦ ¦На постаналитическом этапе оцениваются: ¦ ¦ ¦- правильность внесения результатов в бланк ¦ ¦ ¦исследования; ¦ ¦ ¦- своевременное доведение информации до врача, ¦ ¦ ¦назначившего исследование ¦ +------------------+------------------------------------------------------+ ¦12. Нормативные ¦1. Безопасность работы с микроорганизмами III - IV ¦ ¦ссылки ¦групп патогенности с гельминтами. СП 17-129РБ 2000. ¦ ¦ ¦2. Применение ультрафиолетового бактерицидного ¦ ¦ ¦излучения для обеззараживания воздуха и поверхностей в¦ ¦ ¦лечебно-профилактических учреждениях от 01.06.2001 N ¦ ¦ ¦26-01-01. ¦ ¦ ¦3. Приказ МЗ РБ от 25 ноября 2002 г. N 165 "О ¦ ¦ ¦проведении дезинфекции и стерилизации учреждениями ¦ ¦ ¦здравоохранения". ¦ ¦ ¦4. Методические указания МУ N 90-9908 "Контроль ¦ ¦ ¦качества стерилизации изделий медицинского ¦ ¦ ¦назначения", Минск, 1999 г. ¦ ¦ ¦5. Санитарные правила и нормы 2.1.7.14-20-2005 ¦ ¦ ¦"Правила обращения с медицинскими отходами". ¦ ¦ ¦6. Инструкция 4.2.10-22-1-2006 "Методы ¦ ¦ ¦микробиологического контроля санитарно-гигиенического ¦ ¦ ¦состояния помещений в организациях здравоохранения и ¦ ¦ ¦стерильности изделий медицинского назначения". ¦ ¦ ¦7. Приказ МЗ РБ N 351 от 16.12.1998 "О пересмотре ¦ ¦ ¦ведомственных нормативных актов, регламентирующих ¦ ¦ ¦вопросы по проблеме ВИЧ/СПИД". ¦ ¦ ¦8. Инструкция N 113-0801 от 05.09.2001 "Гигиеническая ¦ ¦ ¦и хирургическая антисептика кожи рук медицинского ¦ ¦ ¦персонала". ¦ ¦ ¦9. Постановление Главного государственного ¦ ¦ ¦санитарного врача РБ N 71 от 11.07.2003 "Об ¦ ¦ ¦утверждении и введении санитарных правил устройства, ¦ ¦ ¦содержания и эксплуатации ЛПО" ¦ +------------------+------------------------------------------------------+ ¦13. Безопасность ¦В соответствии с требованиями нормативных документов ¦ ¦персонала ¦ ¦ ¦------------------+------------------------------------------------------- -------------------------------- <*> Описана типовая процедура. Если в инструкции производителя указаны иные требования к отбору, хранению и транспортировке проб, процедуре анализа и учету результатов, то необходимо следовать инструкции производителя. Приложение 10 ПОРЯДОК ВКЛЮЧЕНИЯ ВЫПОЛНЕННЫХ ЛАБОРАТОРИЕЙ ИССЛЕДОВАНИЙ В СТАТИСТИЧЕСКИЙ ОТЧЕТПри составлении статистического отчета о количестве выполненных исследований в лаборатории руководствоваться следующими нормами: 1. Исследование на бледную трепонему в темном поле - 1 исследование. 2. МРП с кардиолипиновым антигеном качественный вариант - 1. 3. МРП количественный вариант - 1. 4. RPR качественный вариант - 1. 5. RPR количественный вариант - 1. 6. ИФА - 1. 7. РПГА качественный вариант - 1. 8. РПГА количественный вариант - 1. 9. РИФ-абс + РИФ-200 качественный вариант - 2 исследования. 10. РИФ-абс + РИФ-200 количественный вариант - 2. 11. Исследование ликвора в одной серореакции - 1 (в двух - 2 и т.д.). 12. Общеклиническое исследование ликвора: - цитоз - 1 исследование; - общий белок - 1; - реакция Панди - 1; - реакция Нонне-Апельта - 1; - реакция Ланге - 1. 13. Биохимическое исследование ликвора: 1 показатель - 1 исследование. |
Новости законодательства
Новости Спецпроекта "Тюрьма"
Новости сайта
Новости Беларуси
Полезные ресурсы
Счетчики
|
